Rozdíl mezi GFP a EGFP

klíčový rozdíl mezi GFP a EGFP je to GFP je protein divokého typu začleněný do molekulárního klonování ne savčích buněk, zatímco EGFP je vylepšený nebo zkonstruovaný typ GFP, který lze použít na savčí buňky.

Molekulární klonování je pokročilá technika, kterou vědci používají při expresi proteinů pomocí rekombinantní technologie. V technologii rekombinantní DNA je nutné transformovat rekombinantní vektor úspěšně na hostitelský organismus. Během transformačního procesu by proto mělo být identifikováno a potvrzeno, zda byl požadovaný gen transformován nebo ne do hostitele. Abychom to mohli zhodnotit, molekulární biologové používají několik technik. Z těchto technik je jeden reportérový gen. Tyto reportérové ​​geny fungují jako selektovatelné markery pro výběr správných transformantů. Green Fluorescent Protein (GFP) a Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) jsou tedy dva reportérové ​​proteiny používané při molekulárním klonování.

OBSAH

1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je GFP
3. Co je EGFP
4. Podobnosti mezi GFP a EGFP
5. Porovnání bok po boku - GFP vs. EGFP v tabulkové formě
6. Shrnutí

Co je GFP?

GFP je protein divokého typu, který obsahuje 238 aminokyselinových zbytků a několik volitelných oblastí aminokyselinových sekvencí, které jej odlišují od ostatních fluorescenčních proteinů. Kromě toho byl tento protein divokého typu původně izolován od Aequorea Victoria; druh medúzy. Avšak v přírodních jevech byla medúza schopna vyvolat fluorescenci zelené barvy v reakci na určité podněty.

Dříve tento koncept vědce překvapil a rozhodli se ho použít na své technologie rekombinantní DNA. Vědci proto použili tuto mutantní formu genu divokého typu jako reportérový gen ve svých studiích genové exprese. Gen divokého typu GFP je schopen produkovat protein, který dává fluorescenci při pokojové teplotě nebo pod UV světlem. Proto při vložení do transformantů exprimuje a vytváří fluorescenci. Pokud fluorescence nastane po transformačním procesu, potvrdí to úspěch transformačního procesu. Zjednodušeně řečeno, fluorescenční emise signalizuje úspěšnou transformaci vektoru, který nese požadovaný gen do hostitele.

Obrázek 01: GFP

Z tohoto důvodu se GFP chová jako in vivo marker genové exprese. V současné době se pro produkci GFP používají techniky genetického inženýrství. K dispozici je také mnoho vylepšených verzí GFP, jako je EGFP. To tedy umožňuje efektivní využití GFP ve studiích molekulárního klonování a genové exprese.

Co je EGFP?

Vylepšená zelená fluorescenční bílkovina nebo EGFP je vylepšená verze GFP. Jednoduše řečeno, můžeme definovat EGFP jako upravenou verzi GFP divokého typu. Když gen divokého typu GFP mutuje, vyvolává prospěšné účinky. Mutovaný gen GFP tedy umožňuje expresi nových znaků, a v důsledku toho můžeme produkovat vylepšený GFP se zlepšenými charakteristikami. Kromě toho můžeme do genu GFP divokého typu úspěšně zavést mutace pomocí ozařování nebo chemickými metodami. Tyto mutované geny pak produkují EGFP, který má výhodnější vlastnosti.

Obrázek 02: EGFP

Vylepšené vlastnosti EGFP jsou následující;

• Je schopen emitovat silnější fluorescenční signály.
• Má vysokou citlivost.
• Může jej použít na savčích buňkách místo prokaryot a jiných eukaryotů nižší úrovně.
• Také poskytuje zvýšenou čistotu produktu.

Proto je EGFP ve srovnání s GFP preferovanou volbou pro studie genové exprese. Ve srovnání s GFP je však produkt dražší.

Jaké jsou podobnosti mezi GFP a EGFP?

• GFP a EGFP jsou dva proteiny, které mají schopnost emitovat zelenou barvu
• Proto oba fungují jako reportérové ​​proteiny ve studiích genové exprese.
• Rovněž je možné syntetizovat obojí pomocí technologie rekombinantní DNA.
• Kromě toho je snadné tyto mutace dále mutovat za účelem syntézy vylepšených forem.

Jaký je rozdíl mezi GFP a EGFP?

Reportérový gen je gen, který se váže s daným genem v technologii rekombinantní DNA. Signalizuje úspěšnou transformaci rekombinantního vektoru na hostitele. Zde jsou GFP a EGFP dva typy zelených fluorescenčních proteinů, které fungují jako reportérové ​​proteiny. Klíčovým rozdílem mezi GFP a EGFP je však to, že GFP je divokého typu, zatímco EGFP je upravená verze GFP. Kromě toho má EGFP výhodnější vlastnosti než GFP. Například EGFP produkuje silnější zářivkové světlo a je citlivější než GFP. Další rozdíl mezi GFP a EGFP jsou systémy, ve kterých je můžeme použít. Non-savčí systémy používají GFP, zatímco savčí systémy používají EGFP.

Níže uvedený infographic představuje rozdíl mezi GFP a EGFP v tabulkové formě.

Shrnutí - GFP vs EGFP

GFP a EGFP jsou reportérové ​​proteiny ve studiích molekulárního klonování a genové exprese. GFP je protein divokého typu, což je zelený fluorescenční protein. Protein byl zpočátku izolován od medúzy Aequorea victoria. Naopak EFGP je vylepšená forma GFP proteinu. Je to mutant divokého typu se zlepšenými charakteristikami. EFGP má tedy vyšší sílu signálu a vyšší citlivost. Proto je můžeme použít na savčí vektory. Naproti tomu použití GFP je hlavně na vektorech, které nejsou savci. Ve všech, to je rozdíl mezi GFP a EGFP.

Odkaz:

1.Cinelli, RA, et al. "Vylepšený zelený fluorescenční protein jako nástroj pro analýzu dynamiky a lokalizace proteinů: Lokální fluorescenční studie na úrovni jedné molekuly." Photochemistry and Phobobiology., US National Library of Medicine, červen 2000. K dispozici zde  
2. „PDB101: Molekula měsíce: Zelený fluorescenční protein (GFP).“ RCSB: PDB-101. K dispozici zde

Obrázek se svolením:

1. “GFP fluorescenční proteinový film” od Erin Rod - vlastní práce, (CC BY-SA 4.0) přes Commons Wikimedia 
2. „CA2 amigo2 eGFP myš“ Dudek, Serena; Curuana, Douglas; Carstens, Kelly - vlastní práce, (CC BY-SA 3.0) přes Commons Wikimedia