Rozdíl mezi hybridizací in situ a imunohistochemií

Klíčový rozdíl - hybridizace in situ vs. imunohistochemie
 

Diagnostika rakoviny a infekčních chorob je populární trend, ve kterém se používají nové techniky založené na proteomice a genomice za účelem identifikace nádorů nebo infekčních buněk, jejich proliferace a míst vývoje buněk a analýzy genetického základu většiny přenosných a nepřenosných nemocí. Výsledkem bude přesné zpracování a navrhování léků a vývoj přizpůsobených terapií nemocí. In situ hybridizace (ISH) a imunohistochemie (IHC) jsou dvě takové široce používané techniky v biologii rakoviny a klíčový rozdíl mezi hybridizací in situ a imunochemií spočívá v molekulách, které se používají v analytickém postupu.. V ISH se sondy nukleových kyselin používají v analýze, zatímco v IHC se pro diagnostická stanovení používají monoklonální a polyklonální protilátky.

OBSAH

1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je hybridizace in situ
3. Co je imunohistochemie
4. Podobnosti mezi hybridizací in situ a imunohistochemií
5. Porovnání bok po boku - hybridizace in situ vs imunohistochemie v tabulkové formě
6. Shrnutí

Co je hybridizace in situ (ISH)?

In situ hybridizace je technika hybridizace nukleových kyselin, která se provádí přímo na části nebo části tkáně, v celé tkáni nebo v buňkách. Technika závisí na teorii Watson Crick komplementárního párování bází, což vede k hybridům DNA-DNA nebo DNA-RNA hybridy, které mohou detekovat mutované geny nebo identifikovat požadovaný požadovaný gen. Jednovláknové DNA sekvence, dvouvláknové DNA sekvence, jednovláknové RNA sekvence nebo syntetické oligonukleotidové sekvence se používají jako sondy během hybridizační techniky a tyto sondy jsou značeny radioaktivním fosforem na svém 5 'konci pro identifikační postupy autoradiografií nebo značené pomocí fluorescenčních barviv . Existují různé typy technik ISH na základě typu použité sondy a použitého typu vizualizační techniky.

Obrázek 01: Fluorescenční hybridizace in situ

Existuje mnoho aplikací ISH, zejména v molekulární diagnostice infekčních chorob s cílem identifikovat přítomnost patogenů a potvrdit patogen pomocí molekulární diagnostiky. Používá se také v oblastech vývojové biologie, karyotypizace a fylogenetické analýzy a fyzického mapování chromozomů.

Co je imunohistochemie (IHC)?

V technice IHC je hlavní analyzovanou molekulou antigen. Během IHC se používají monoklonální a polyklonální protilátky ke stanovení přítomnosti antigenů po infekci nebo stavu maligní buněčné proliferace. Tato technika je založena na vazbě antigen-protilátka a pro tuto techniku ​​jsou použity enzymové značky; jednou takovou aplikací je ELISA (enzymaticky vázaný imunosorbentový test). Markery mohou také být fluorescenčně značené protilátky nebo radioaktivně značené protilátky.

Obrázek 02: Imunohistochemie

IHC je široce používán pro detekci rakovinných buněk. Diagnostické postupy se zaměřují na antigeny přítomné v nádorových buňkách pro identifikaci a charakterizaci nádoru. Stejný postup se používá pro diagnostiku infekčních agens. Monoklonální a polyklonální protilátky se také používají k analýze různých genových produktů umožněním vazebné reakce protilátka-antigen mezi požadovaným proteinem a podanou syntetickou protilátkou.

Jaké jsou podobnosti mezi hybridizací in situ a imunohistochemií?

• ISH a IHC jsou vysoce specifické reakce.
• Obě techniky jsou vysoce přesné.
• Obě techniky lze použít v diagnostice rakoviny a infekčních chorob.
• Tyto techniky se provádějí ve sterilních prostředích in vitro.
• Oba jsou rychlé techniky, které poskytují reprodukovatelné výsledky.
• ISH a IHC používají detekční metody, jako je rádiové značení a fluorescenční techniky.

Jaký je rozdíl mezi hybridizací in situ a imunohistochemií?

In situ hybridizace vs imunohistochemie
ISH je technika hybridizace nukleových kyselin, která se provádí přímo na části nebo části tkáně nebo celé tkáni.	IHC je technika, při které se monoklonální a polyklonální protilátky používají ke stanovení přítomnosti antigenů, což jsou speciální proteinové markery umístěné na buněčných površích.
Typ analyzovaných biologických molekul
ISH analyzuje nukleové kyseliny.	IHC analyzuje proteiny-antigeny.
Základy biochemické reakce
U této techniky dochází k doplňkovému párování bází mezi DNA-DNA nebo DNA-RNA.	Interakce antigen-protilátka se podílejí na imunohistochemii.
Metody detekce spojené s enzymem
Metody detekce spojené s enzymem nelze v ISH použít.	Metody detekce spojené s enzymem lze použít v IHC.

Shrnutí - hybridizace in situ vs imunohistochemie

Molekulární diagnostika je rychlou a potvrzující metodou, kterou lze použít k identifikaci nepřenosného onemocnění, jako je rakovina nebo přenosné onemocnění, jako je HIV nebo tuberkulóza, na základě molekulárních markerů přítomných na buňkách, které vedou k projevu onemocnění. Molekulární markery mohou být přítomny ve formě exprimovaných proteinů nebo na genetické úrovni, na základě kterých jsou zavedeny různé nové techniky ke zvýšení účinnosti a jsou méně pracné, i když s těmito technikami jsou spojeny vysoké náklady. ISH tedy závisí na tvorbě hybridů DNA-DNA nebo DNA-RNA a IHC závisí na specifických reakcích mezi protilátkou a antigenem. To je rozdíl mezi hybridizací in situ.

Stáhněte si PDF verzi hybridizace In situ vs imunohistochemie

Můžete si stáhnout PDF verzi tohoto článku a použít ji pro účely offline podle citace. Stáhněte si PDF verzi zde Rozdíl mezi hybridizací in situ a imunohistochemií.

Reference:

1. Duraiyan, Jeyapradha, et al. "Aplikace imunohistochemie." Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, srpen 2012, k dispozici zde. Přístup k 24. srpnu 2017.
2. „Hybridizace in situ (ISH).“ Národní centrum pro biotechnologické informace, Národní lékařská knihovna USA, k dispozici zde. Přístup k 24. srpnu 2017.

Obrázek se svolením:

1. „FISH (Fluorescent In situ Hybridization)“ MrMatze - vlastní práce (CC BY-SA 3.0) přes Commons Wikimedia
2. „Immunohistochemicalstaining2“ Imoen na anglickém jazyce Wikipedia (CC BY-SA 3.0) přes Commons Wikimedia