klíčový rozdíl mezi inzerčními a substitučními vektory je to, že inzerční vektor má schopnost vložit střední délky cizí DNA, zatímco náhradní vektor má schopnost pojmout větší délky cizí DNA.
Fágové vektory jsou bakteriofágy používané pro klonování. Existují dva typy fágových vektorů; jsou to inzerční vektor a náhradní vektor. Také všechny fágové vektory sestávají z neesenciálních genů. Tyto geny však musí být odstraněny z fágů, aby se usnadnily nové inzerty cizí DNA.
1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co jsou vkládací vektory
3. Co jsou náhradní vektory
4. Podobnosti mezi vektory vložení a nahrazení
5. Porovnání bok po boku - vložení vs. nahrazení vektorů v tabulkové formě
6. Shrnutí
Za prvé, inzerční vektor je nejjednodušší forma klonovacích vektorů lambda. Ve skutečnosti je to typ fágového vektoru, který má jedinečné restrikční místo zavedené do vektorového genomu v poloze případné DNA. Fágová DNA dále zůstává bez odstranění. Toto neodstranění fágové DNA omezuje velikost inzertu (cizí DNA), který má být klonován ve vektoru. Tyto vektory jsou navíc užitečné při klonování a expresi cDNA. GT10, GT11 a Zap jsou příklady tohoto vektoru.
Obrázek 01: Lambda fág
Vkládací vektor se skládá z jediného rozpoznávacího místa. Primární funkcí tohoto vektoru je vývoj cDNA knihoven odvozených od eukaryotických mRNA sekvencí. Navíc může pojmout pouze délky cizí DNA v rozmezí mezi 05-11 kb. Má také jedinečné místo štěpení pro inzerci cizí DNA.
Náhradní vektor nebo substituční vektor je typ fágového vektoru vyvinutého odstraněním střední oblasti fragmentu fágové DNA. Požadovaný inzert cizí DNA nahrazuje fágovou DNA.
Obrázek 02: Náhradní vektor
Náhradní vektory jsou důležité při vytváření genomických knihoven, jako jsou EMBL4 a Charon40. Tyto vektory mohou pojmout větší délku cizí DNA v rozmezí mezi 08-24 kb. Výplňová oblast také sestává z genu, který činí fágový vektor neživotaschopným uvnitř bakteriálního hostitele.
Vložení vs Náhradní vektory | |
Inserční vektor je typ fágového vektoru, který má restrikční místo zavedené do fágového genomu v místě nepovinné DNA. | Náhradní vektor je typ fágového vektoru, který byl vyvinut odstraněním střední části fragmentu fágové DNA |
Velikost vložených fragmentů | |
Délka 05-11 kb | Délka 08-24 kb |
Výplňový fragment | |
Žádný fragment výplně | Výplňový fragment bude nahrazen cizí vložkou |
Funkce | |
Důležité je vytvořit knihovny cDNA | Důležité při vytváření knihoven genomu |
Příklady | |
GT10, GT11 a Zap jsou příklady | EMBL4 a Charon40 jsou příklady |
Místo štěpení | |
Existuje jedinečné místo štěpení | Místo štěpení obsahuje geny, které nejsou nezbytné pro lytický cyklus |
Vkládací i náhradní vektory jsou dva typy fágových vektorů. Oba vektory mají restrikční místa, která usnadňují umístění nových inzertů cizí DNA. Vkládací vektory jsou důležité při vytváření knihoven cDNA, zatímco náhradní vektory jsou důležité při vytváření genomických knihoven. Inzerční vektory navíc pojímají inzerty DNA střední délky. Náhradní vektory však mohou pojmout větší délky inzertů cizí DNA. Celkově se jedná o klíčový rozdíl mezi inzerčním a nahrazovacím vektorem.
1. Hasty, P, et al. "Účinnost inzerce versus cílení na náhradní vektor se liší v různých chromozomálních lokusech." Molecular and Cellular Biology, USA National Library of Medicine, prosinec 1994, k dispozici zde.
2. „Vkládací vektory Lambda.“ Biology 335 Lecture Notes - Lambda Vectors, k dispozici zde.
3. „Náhradní vektor“. Náhradní vektor - Terminologie molekulární biologie pro náhradní vektor - GenScript, k dispozici zde.
1. „Lambda fág“ od Lizanne Koch - vlastní práce s ChemBioDraw (Public Domain) přes Commons Wikimedia