Rozdíl mezi fúzí a polymerem Taq

Key Difference - Phusion vs Taq Polymeráza
 

DNA polymerázy jsou široce používanými enzymy v technikách molekulární biologie a jsou také přirozeně přítomny ve všech organismech, které podléhají replikaci DNA. Jsou to klíčové polymerizační enzymy, které se vyskytují během replikace. DNA polymeráza je schopna přidat nukleotidy na volný 3 'konec řetězce DNA, čímž způsobí rozšíření nového vlákna. V současné době je vzhledem k vývoji molekulární biologie v diagnostice onemocnění a průmyslových aplikacích důležité vyrábět polymerázy mající různé prospěšné vlastnosti. To zvyšuje přesnost metody a činí ji rychlejší technikou. Phusion a Taq polymeráza jsou dva komerčně vyráběné termostabilní polymerázové enzymy, které se používají ve speciálních molekulárních aplikacích. Fúze je DNA polymeráza izolovaná z Pyrococcus furiosus a používá se hlavně v klonovacích experimentech ke zvýšení věrnosti. Taq DNA polymeráza je standardní DNA polymeráza použitá v polymerázové řetězové reakci (PCR) a je izolována z termostabilní bakterie; Thermus aquaticus. klíčový rozdíl mezi těmito dvěma enzymy je zdrojový mikroorganismus. Fúze je izolována od extremofilů, Pyrococcus furiosus zatímco Taq polymeráza je izolována z termofilu, Thermus aquaticus.

OBSAH

1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je to Phusion
3. Co je Taq Polymerase
4. Podobnosti mezi fúzí a polymerem Taq
5. Porovnání vedle sebe - Phusion vs Taq Polymerase v tabulkové formě
6. Shrnutí

Co je Phusion?

Fúzní DNA polymeráza je nová polymeráza, která se vyrábí izolováním enzymu z Pyrococcus furiosus, což je extremofilní Archaea. Tyto mikroby sídlí v extrémně vysokých teplotách, čímž se polymeráza stává vysoce tepelně stabilní polymerázou. Fúzní polymeráza se používá k získání extrémní věrnosti nad konvenční termostabilní polymerázou; Taq polymeráza. Fúzní polymeráza je schopna amplifikovat dlouhé templáty až do 7,5 kB genomické DNA. Optimální polymerační kapacita Phusion polymerázy je 72⁰ C. Fúze se také používá v klonovacích produktech pro sekvenování, expresní analýzu a mutační analýzu.

Fúzní DNA polymeráza má 3 '- 5' exonukleázovou aktivitu. To umožňuje korekturu nově syntetizovaného vlákna po syntéze. Nukleotidové neshody se tedy snadno opraví. Má tedy nižší chybovost. Celkové výhody Phusion polymerázy jsou;

• Extrémní věrnost
• Vysoká rychlost a zkrácení doby prodloužení
• Robustní reakce a vyžaduje minimální optimalizaci
• Vysoký výnos

Obrázek 01: Fúze

Hlavní nevýhoda Phusion polymerázy je v tom, že je inhibována v přítomnosti deoxyuridin trifosfátu (dUTP). Když se dUTP hromadí v reakční směsi, může to inhibovat působení Phusion polymerázy. Tomu je zabráněno zpracováním reakční směsi dUTPázou před přidáním enzymu. V současné době je jako řešení tohoto problému používána varianta Phusion polymerázy rezistentní na dUTP známá jako Pfu Turbo..

Co je Taq Polymerase?

Taq DNA polymeráza vynález revoluci v oblasti molekulární biologie. Vyřešil hlavní problém v amplifikaci DNA. Taq DNA polymeráza je tepelně stabilní polymerázový enzym extrahovaný a izolovaný z termofilní bakterie, Thermus aquaticus. Objev těchto enzymů vede k vývoji PCR. Tento enzym umožnil použití polymerázové řetězové reakce při amplifikaci DNA místo konvenčních pracných klonovacích technik. PCR se nyní používá v molekulární diagnostice, v zemědělských a průmyslových oborech, přičemž k této technice bylo přidáno mnoho nových variací.

Obrázek 02: Taq polymeráza

Taq DNA polymeráza funguje v optimálním teplotním rozmezí mezi 72⁰C - 80⁰C. Taq DNA polymeráza vyžaduje kofaktor; hořčík pro svou funkci. Taq polymeráza nemá 3 '- 5' korekční schopnost, proto je míra chyb Taq DNA polymerázy vysoká ve srovnání s novějšími typy DNA polymeráz, jako je Phusion polymeráza atd. Avšak popularita Taq DNA polymerázy zůstává stejné po celém světě vědy díky pohodlí a flexibilitě enzymu.

Jaké jsou podobnosti mezi fúzí a polymerázou Taq?

• Enzymy Phusion i Taq polymerázy jsou polymerizační enzymy, které jsou schopné přidávat nukleotidy na 3 'volný konec řetězce DNA..
• Polymerázy Phusion i Taq vyžadují k zahájení polymerace sekvenci primerů.
• Polymerázy Phusion i Taq jsou tepelně stabilní.
• Polymerázy Phusion i Taq se používají v mechanismech PCR k amplifikaci DNA.
• Při přidávání polymerázy do reakční směsi se přidají polymerázy Phusion i Taq jako poslední, aby se zajistila účinnost enzymu.
• Polymerázy Phusion i Taq jsou komerčně syntetizovány pro experimentální účely molekulární biologie.
• Polymerázy Phusion i Taq vyžadují ke splnění své funkce kofaktor.

Jaký je rozdíl mezi fúzí a polymerem Taq?

Phusion vs Taq Polymerase
Fúze je DNA polymeráza izolovaná z Pyrococcus furiosus a používá se hlavně v klonovacích experimentech ke zvýšení věrnosti.	Taq DNA polymeráza je standardní DNA polymeráza použitá v polymerázové řetězové reakci (PCR) a je izolována z termostabilní bakterie, Thermus aquaticus.
Zdrojový organizmus
Fúze je extrahována z extremofilního archaea - Pyrococcus furiosus.	Tato literární díla sahají od období kolonizace po období dekolonizace.
Schopnost korektního čtení
Ve Phusion je k dispozici schopnost čtení 3 '- 5' důkazů.	3 '- 5' důkazová schopnost čtení v polymeru Taq chybí.
Věrnost
S Phusion je vysoká věrnost.	Polymeráza Taq vykazuje nízkou věrnost.
Zesílení
Fúze je schopna amplifikovat dlouhé fragmenty DNA.	Taq polymeráza je schopna amplifikovat mnohem kratší fragmenty DNA.
Otrava dUTP
Fúzní akce je inhibována akumulačním lichým.	Taq polymeráza není inhibována dUPT.

souhrn - Phusion vs Taq polymeráza

Phusion a Taq DNA polymeráza jsou dvě tepelně stabilní polymerázy, které se používají v technikách PCR. Fúze je polymeráza izolovaná z extremofilů, Pyrococcus furiosus zatímco Taq je izolován z termostabilních bakterií Thermus aquaticus. Objev Taq DNA polymerázy vede k vynálezu PCR. Phusion má oproti Taq mnoho výhod, díky nimž je Phusion lepší volbou při výrobě DNA s vysokou věrností. Taq polymeráza se však stále používá jako standardní polymerázový enzym v PCR. To je rozdíl mezi Phusion a Taq polymerázou.

Odkaz:

1.Biolabs, Nová Anglie. "Taq DNA polymerázy." Biológy v Nové Anglii: Činidla pro průmysl věd o živé přírodě. K dispozici zde  
2. „Phusion DNA Polymerase.“ New England Biolabs. K dispozici zde 

Obrázek se svolením:

1.'GAM ilustruje Nivin Nasri'By NivinN - vlastní práce, (CC BY-SA 4.0) prostřednictvím Commons Wikimedia  
2.'Taq'By Adenosine - vlastní práce, (CC BY-SA 3.0) přes Commons Wikimedia