Rozdíl mezi RP HPLC a HIC

klíčový rozdíl mezi RP HPLC a HIC je to RP HPLC používá polárnější mobilní fázi a méně polární stacionární fázi. Zatímco HIC používá hydrofobní stacionární fázi, která umožňuje, aby se k ní připojily hydrofobní molekuly.

Chromatografie je analytická technika, která pomáhá oddělit směs do jejích složek. Nejprve musíme vzorek rozpustit do roztoku. Tato směs roztok-látka se nazývá mobilní fáze. Poté mobilní fáze prochází dalším materiálem zvaným stacionární fáze. Stacionární fáze určuje oddělení složek. K separaci dochází v důsledku dělení materiálu mezi mobilní fází a stacionární fází.

OBSAH

1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je RP HPLC
3. Co je HIC
4. Porovnání bok po boku - RP HPLC vs. HIC v tabulkové formě
5. Shrnutí

Co je RP HPLC?

Termín RP HPLC znamená Vysoce výkonná kapalinová chromatografie s reverzní fází. Zahrnuje oddělení složek ve směsi podle hydrofobicity. Hydrofobní složky v mobilní fázi se spojují s imobilizovanými hydrofobními ligandy ve stacionární fázi, zatímco hydrofilní složky se eluují stacionární fází, aniž by se připojily k povrchu stacionární fáze.

Obrázek 01: HPLC zařízení

Tato metoda má navíc větší reprodukovatelnost ve srovnání s jinými chromatografickými technikami a vykazuje také širokou použitelnost. Proto tuto metodu používáme v laboratořích pro více než 75% všech metod HPLC. Většinou používáme jako mobilní fázi vodnou směs vody s mísitelným polárním organickým rozpouštědlem. Tím bude zajištěno připojení hydrofobních složek v roztoku k povrchu stacionární fáze.

Co je HIC?

Termín HIC znamená Hydrofobní interakční chromatografie. Je to typ HPLC s reverzní fází a tato metoda se používá hlavně pro separaci velkých biomolekul, jako jsou proteiny. Při této metodě je nutné použít vodné médium k přípravě vzorku biomolekuly. Je to proto, že organická rozpouštědla mohou způsobit denaturaci proteinů. Navíc tato technika používá interakci mezi velkými molekulami s mírně hydrofobním povrchem stacionární fáze. Kromě toho musíme ve vzorku použít vysokou koncentraci soli, protože to povzbuzuje, aby byl protein na obalu zadržen; tento proces se nazývá solení. Postupným snižováním koncentrace soli můžeme biomolekuly eluovat odděleně podle jejich hydrofobicity.

Obvykle tato metoda používá podmínky opačné než podmínky ionexové chromatografie. V této technice musíme nejprve projít pufrovacím roztokem kolonou, abychom snížili solvataci soluty ve vzorku. Díky tomu jsou vystaveny hydrofobním oblastem proteinu. Pokud je však molekula hydrofobnější, je pro podporu vazby zapotřebí méně soli. Zde se nejprve eluují méně hydrofobní soluty a podle změny koncentrace soli se eluuje více hydrofobních solutů jako poslední.

Jaký je rozdíl mezi RP HPLC a HIC?

Chromatografie je analytická technika pro separaci složek ve směsi. RP HPLC a HIC jsou dvě specializované chromatografické techniky. Klíčový rozdíl mezi RP HPLC a HIC je v tom, že RP HPLC používá polárnější mobilní fázi a méně polární stacionární fázi, zatímco HIC používá hydrofobní stacionární fázi, která umožňuje, aby se k ní mohly připojit hydrofobní molekuly..

Níže uvedený infographic shrnuje rozdíl mezi RP HPLC a HIC.

Shrnutí - RP HPLC vs. HIC

Chromatografie je analytická technika pro separaci složek ve směsi. RP HPLC a HIC jsou dvě specializované chromatografické techniky. Klíčový rozdíl mezi RP HPLC a HIC je v tom, že RP HPLC používá polárnější mobilní fázi a méně polární stacionární fázi, zatímco HIC používá hydrofobní stacionární fázi, která umožňuje, aby se k ní připojily hydrofobní molekuly..

Odkaz:

1. „Separační režimy HPLC.“ Waters, k dispozici zde.

Obrázek se svolením:

1. „Preparativní HPLC“ od GYassineMrabetTalk & # x2709; Tento vektorový obrázek nespecifikovaný W3C byl vytvořen pomocí Inkscape. - Vlastní práce (CC BY 3.0) prostřednictvím Commons Wikimedia