Rozdíl mezi teplou a studenou trypsinizací

Klíčový rozdíl - Teplý vs Studený Trypsinizace

Teplá a studená Trypsinizace jsou dvě metody používané při enzymatické dezagregaci buněk při kultivaci živočišných buněk. klíčový rozdíl mezi teplou a studenou trypsinizací, jak název napovídá, závisí na teplotě, při které se trypsin přidává pro buněčnou desagregaci. Teplá trypsinizace probíhá za vyšších teplot (36,5 - 37%) ⁰C) zatímco trypsinizace za studena probíhá za nízkých teplot.

Během procesu primární kultivace živočišných buněk se používají tři hlavní metody, které se ukázaly jako úspěšné. Tyto tři metody zahrnují mechanickou disagregaci buněk, enzymatickou disagregaci buněk a techniku primárního explantace. Enzymatická disagregace buněk vede k izolaci buněk a provádí se enzymem degradujícím protein trypsin. Tento proces je proto označován jako Trypsinizace. Trypsinizaci lze provést za dvou různých podmínek, a to Teplá Trypsinizace a Studená Trypsinizace. Teplá trypsinizace je metoda ošetření buněk trypsinem za teplých podmínek při teplotě 36,5 - 37 ⁰C. Studená trypsinizace je proces ošetření trypsinem, který probíhá za chladnějších podmínek, s výhodou v ledu při zachování velmi nízkých teplot..

OBSAH

1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je to teplá trypsinizace
3. Co je studená trypinizace
4. Podobnosti mezi teplým a studeným trypsinizací
5. Porovnání bok po boku - teplá vs. studená trypsinizace v podobě tabulky
6. Shrnutí

Co je Teplá Trypsinizace?

Trypsinizaci lze provést za účelem dezagregace buněčných složek, aby se buňky izolovaly, aby se vytvořila primární buněčná kultura. Trypsin je enzym degradující protein a enzymatickou směsí používanou při trypsinizaci může být buď surový extrakt, nebo čištěný produkt. O surovém extraktu se říká, že je účinnější při lýze proteinů a rozpadu buněk, protože obsahuje další degradační enzymy.

Teplá trypsinizace je nejčastěji používanou enzymatickou metodou pro desagregaci buněk, která probíhá za vyšších teplot. Před ošetřením trypsinizací je požadovaná tkáň nasekána na menší kousky. Usnadňuje proces snadného rozdělování. Nasekaná tkáň se pak promyje ve speciálním médiu známém jako médium disekční bazální soli.

Po dokončení promývacího kroku se buňky transformují do baňky obsahující aktivní enzym, kterým je trypsin. Protože tato technika zahrnuje teplý trypsinizační protokol, trypsin je umístěn při teplotě kolem 37 ° C ⁰C asi čtyři hodiny.

Obrázek 01: Trypsin

Obsahy jsou smíchány a protřepávány pomocí centrifugačních metod pro snadnost protokolu a pro urychlení procesu disagregace. Jakmile je dosaženo doporučeného času, mohou být buňky odvozeny ze supernatantu. Buňky odvozené ze supernatantu se poté inkubují při určité teplotě a čase.

Co je studená trypinizace?

Studená trypsinizace je dalším typem trypsinizace, která probíhá za chladných podmínek. V této technice jsou buňky, které jsou nasekané a promyté, umístěny do lahviček na ledu a poté namočeny trypsinem. Doba namáčení je mnohem delší - asi 6 - 24 hodin.

Po dokončení procesu máčení se trypsin odstraní z buněčného lyzátu a tkáňové kousky se dále inkubují při 37 ° C.⁰C po dobu asi 20 - 30 minut. Rozklad buněk je způsoben opakovaným pipetováním tkáňové směsi. To umožní buňkám disociovat se z membrány a dospět k supernatantu. Jakmile jsou buňky v supernatantu, jsou inkubovány a pěstovány při požadované teplotě a časovém období.

Metoda trypsinizace za studena má několik výhod

Vyšší výnos životaschopných buněk při minimalizaci poškození buněk. Poškození buněk je minimalizováno nepoužíváním odstřeďovacích kroků.
Vysoce výhodná metoda.
Méně pracné.

Hlavním omezením metody studené trypsinizace je, že velká množství nelze použít v jednom případě.

Jaké jsou podobnosti mezi teplým a studeným trypsinizací?

Procesy teplého i studeného trypsinu používají enzym trypsin pro rozčlenění buněk.
V postupech buněčné kultivace pro dezagregaci buněk se používají jak teplé, tak studené procesy trpsinizace.
Při postupech Warm a Cold Trypsinization jsou buňky odvozeny ze supernatantu.

Jaký je rozdíl mezi teplou a studenou trypsinizací?

Teplá vs studená trypinizace
Teplá trypsinizace je metoda ošetření buněk trypsinem za teplých podmínek při teplotě 36,5 - 37 ⁰.	Studená trypsinizace je proces ošetření trypsinem, který probíhá za chladnějších podmínek, s výhodou v ledu při zachování velmi nízkých teplot.
Protokol
Nasekané kousky tkáně se udržují při 37 ° C ⁰C nepřetržitě během celého postupu.	Nasekané kousky tkáně jsou nejprve udržovány při ledových teplotách a poté udržovány při 37 ° C ⁰.
Teplota
Teplá trypsinizace nastává při 36,5 - 37 ⁰	Studená trypsinizace nastává při ledových teplotách.
Spotřebovaný čas
Méně času potřebného pro celý proces (přibližně 4 hodiny) teplé trypsinizace.	Delší doba (asi 6 - 24 hodin) pro studenou trypsinizaci.
Výnos životaschopných buněk
Nízká teplá trypsinizace.	Vysoká trypsinizace za studena.
Použití odstředění
Centrifugace je nutná pro disagregaci buněk při teplé trypsinizaci.	Centrifugace není nutná při studené trypsinizaci.
Počáteční množství tkáně pro trypsinizaci
Větší množství tkáně může být použito v teplé trypsinizaci.	Při studené trypsinizaci lze použít menší množství tkáně.
Poškození buněk
Vysoká díky odstředění v teplé trypsinizaci.	Méně kvůli studené trypsinizaci.

souhrn - Teplý vs Studený Trypsinizace

Trypsinizace je metoda použití proteinu degradujícího enzymu trypsinu pro disagregaci a přípravu primárních buněčných kultur během procesu kultivace buněk. Existují dvě hlavní techniky trypsinizace založené na teplotách použitých během postupu. Jsou to teplá a studená trypsinizace. Teplá trypsinizace se provádí při 37 ° C ⁰C zatímco studená trypsinizace se provádí za ledových podmínek. Ačkoli studená trypsinizace trvá déle, než se dokončí, má se za to, že má vyšší výtěžnost životaschopných buněk. Důvodem je skutečnost, že při studené trypsinizaci je poškození buněk minimalizováno, protože nepoužívá intenzivní odstřeďovací kroky. To je rozdíl mezi teplou a studenou trypsinizací.

Odkaz:

1. „Trypsinizace.“ Trypsinizace - přehled | Témata ScienceDirect. K dispozici zde
2. „Primární buněčná kultura: 3 techniky (s diagramem).“ Diskuse o biologii, 16. října 2015. K dispozici zde

Obrázek se svolením:

1. 'Trypsin active site'By Fdardel - vlastní práce, (CC BY-SA 3.0) přes Commons Wikimedia

Věda a příroda