Rozdíl mezi fágovým vektorem YAC a M13

Klíčový rozdíl - fágový vektor YAC vs. M13
 

Klonování DNA je důležitý proces, který umožňuje množení důležitých fragmentů DNA organismů. Vyžaduje spojení specifické DNA s vektorovou DNA k vytvoření rekombinantní DNA, která se transformuje do hostitelského organismu. Vektor je molekula DNA, která se chová jako prostředek k přenosu cizího genetického materiálu do jiné buňky nebo organismu. Měl by být schopen se replikovat uvnitř hostitelského organismu a produkovat více kopií rekombinantní DNA. Při klonování DNA se používají různé druhy vektorů. Kvasnicový umělý chromozom (YAC) a fágový vektor M13 jsou mezi nimi dva typy. Klíčovým rozdílem mezi fágovým vektorem YAC a M13 je to YAC je umělý chromozom, který se replikuje v kvasinkových buňkách zatímco Fágový vektor M13 je jednovláknová kruhová DNA bakteriofága M13, která se replikuje v E-coli buňky.

OBSAH
1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je to YAC
3. Co je to fágový vektor M13
4. Srovnání bok po boku - fágový vektor YAC vs M13
5. Shrnutí

Co je vektor YAC?

YAC je uměle vytvořený chromozom, který má schopnost nést velký segment cizí DNA a replikovat se v kvasinkových buňkách. Má centromeru, telomer a autonomně se replikující sekvence nezbytné pro replikaci a stabilitu. YAC by také měl nést selektivní marker nebo markery a restrikční místa, aby se z něj stal účinný klonovací vektor. Velké sekvence v rozmezí od 1000 kb do 2000 kb mohou být vloženy do YAC a přeneseny do kvasinek.

Obrázek 01: Vektor YAC

Co je to fágový vektor M13?

Bakteriofág M13 je virus, který infikuje a replikuje se v E-coli. Genom bakteriofága M13 je malý, asi 6,7 kb. Je to jednovláknová, kruhová a pozitivní smyslová DNA. Tento virus specificky infikuje E-coli bakterie přes F pilus. Jakmile vstoupí do ssDNA do bakterie, syntetizuje své komplementární vlákno a stává se dsDNA nebo replikativní formou (RF) M13. RF se může v hostitelském organismu chovat jako plazmid. DsDNA se uvnitř replikuje E-coli a produkuje ssDNA nesoucí nové fágy. Tyto nové fágy jsou průběžně uvolňovány z internetu E-coli bez zabití hostitelské buňky. Infekce však zpomaluje růst E Coli. dsDNA může být extrahována z bakteriálních buněk a použita jako vektory při klonování DNA. Jsou známy jako fágové vektory M13. Lze je snadno manipulovat a použít podobně jako plasmidové vektory.

Inherentní schopnost infekce těchto fágů M13 slouží jako dobrá kvalifikace pro použití jako vektor při klonování genů. Při vývoji M13 do vektoru by se do jeho genomu mělo začlenit několik prvků. Jsou to gen pro lac represorový (lac I) protein, operátorově proximální oblast lac Z gen, lac promotor a vícenásobné klonovací místo (polylinker). Když je dsDNA M13 použita jako vektory, může být ošetřena jako plazmidový vektor. Použití ssDNA M13 má však výhody v sekvenování DNA a místně zaměřené mutagenezi.

Protože fágový vektor M13 nese více klonovacích míst v lacZ V této oblasti lze rekombinované vektory snadno identifikovat skrze modro / bílé kolonie na agarových plotnách obsahujících IPTG a X-Gal. Modré plaky produkované na destičkách neobsahují rekombinované fágy. Proto mohou být pro účely klonování vybrány fágy s inzerty.

Obrázek 02: Bakteriofág M13

Jaký je rozdíl mezi fágovým vektorem YAC a M13?

Fágový vektor YAC vs M13
YAC je geneticky upravený chromozom, který má schopnost nést velký segment cizí DNA a replikovat se v kvasinkových buňkách.	Fágový vektor M13 je virový vektor vyvinutý bakteriofágem M13, který se používá k vložení cizí DNA E-coli.
Účel
YAC byly navrženy tak, aby klonovaly velké fragmenty genomické DNA do kvasinek.	Fágové vektory M13 se používají k vložení cizí DNA do E-coli.
Vložte délku
YAC mohou obsahovat genomické vložky velikosti megabáz (1000 kb - 2000 kb).	Velikost vložek je asi 1 500 bps.
Konstrukce
YAC DNA je obtížné čistit intaktní a vyžaduje vysokou koncentraci pro vytvoření vektorového systému YAC.	Vyskytuje se prostřednictvím cyklického fotosyntetického elektronového řetězce.
Stabilita
YAC je nestabilní.	Fágy M13 lze snadno extrahovat.
Velikost
Enzymy jsou větší molekuly.	Fágy M13 jsou stabilní než YAC.

Shrnutí - YAC vs M13 Phage Vector

YAC je uměle vytvořený vektorový systém využívající specifickou oblast kvasinkového chromozomu k vložení velkých segmentů genetického materiálu do kvasinkových buněk. Fágový vektor M13 je vektorový systém odvozený od bakteriofágu M13, který používá E-coli jako hostitelský organismus. Toto je hlavní rozdíl mezi fágovým vektorem YAC a M13. Oba jsou stejně užitečné v technologii rekombinantní DNA a klonování genů.

Odkaz:
1. „Vektor“. Genetika-poznámky - vektor. N.p., n.d. Web. 16. května 2017. https://genetics-notes.wikispaces.com/Vector
2. „Kvasnicový umělý chromozom.“ Wikipedia. Wikimedia Foundation, 21. dubna 2017. Web. 16. května 2017. .

Obrázek se svolením:
1. „M13B“ od J3D3 - vlastní práce (CC BY-SA 3.0) přes Commons Wikimedia