Rozdíl mezi afinitní a iontoměničovou chromatografií

klíčový rozdíl mezi afinitní a iontoměničovou chromatografií je to můžeme použít afinitní chromatografii k oddělení nabitých nebo nenabitých složek ve směsi, zatímco můžeme použít iontoměničovou chromatografii k oddělení nabitých složek ve směsi.

Chromatografie je technika, kterou můžeme použít k oddělení požadovaných složek ve směsi. Existují různé typy, jako je kapalinová chromatografie, plynová chromatografie atd. Afinitní chromatografie a iontoměničová chromatografie jsou dvě podkategorie kapalinové chromatografie. Také v těchto technikách existují dvě fáze. Jde zejména o stacionární a mobilní fázi. Účelem těchto technik je oddělení složek, v závislosti na vazbě složek, v mobilní fázi na povrch stacionární fáze.

OBSAH

1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je to afinitní chromatografie
3. Co je iontoměničová chromatografie
4. Srovnání vedle sebe - afinitní vs. iontoměničová chromatografie v tabulkové formě
5. Shrnutí

Co je to afinitní chromatografie?

Afinitní chromatografie je biochemická technika, kterou používáme k oddělení složek ve směsi v závislosti na interakcích mezi těmito složkami.

Interakce, které v tomto případě používáme, zahrnují následující:

1. Interakce antigen-protilátka
2. Interakce enzym-substrát
3. Interakce receptor-ligand
4. Interakce protein-nukleová kyselina

V této technice používáme molekulární vlastnosti molekul pro tuto separační techniku. Zde dovolujeme, aby požadovaná sloučenina interagovala se stacionární fází prostřednictvím vodíkové vazby, iontové interakce, disulfidových můstků, hydrofobní interakce atd. Molekuly, které neinteragují se stacionární fází, se eluují jako první. Můžeme ji tedy oddělit od směsi. Požadovaná sloučenina zůstane připojena ke stacionární fázi. Můžeme ji tedy oddělit pomocí elučního rozpouštědla a učinit z něj také eluce, aby se také oddělilo.

Obrázek 01: Chromatografický sloupec

Afinitní chromatografie je užitečná při čištění a koncentrování látky ze směsi pomocí pufrového roztoku. Pomáhá také při snižování nežádoucích látek ve směsi. Při zvažování aparátu, který používáme pro tento proces, bychom měli použít sloupec naplněný naší stacionární fází. Pak bychom měli načíst mobilní fázi, která obsahuje biomolekuly, které se chystáme oddělit. Dále je nechte navázat se stacionární fází. Poté pomocí promývacího pufru můžeme oddělit necílové biomolekuly, ale cílové molekuly by měly mít vysokou afinitu pro stacionární fázi, aby byl proces separace úspěšný..

Co je iontoměničová chromatografie?

Iontová chromatografie je forma kapalinové chromatografie, ve které můžeme analyzovat iontové látky. Často se používá k analýze anorganických aniontů a kationtů (tj. Chloridových a dusičnanových aniontů a draslíku, kationtů sodíku). I když je to méně běžné, můžeme analyzovat i organické ionty. Navíc můžeme tuto techniku ​​použít k čištění proteinů, protože proteiny jsou nabité molekuly při určitých hodnotách pH. Zde používáme pevnou stacionární fázi, ke které se mohou nabité částice připojit. Jako pevný nosič lze například použít pryskyřičné polystyren-divinylbenzenové kopolymery.

Obrázek 02: Fáze iontové výměnné chromatografie

Pro další vysvětlení má stacionární fáze fixované ionty, jako jsou síranové anionty nebo kvartérní aminové kationty. Každý z nich by se měl spojovat s protiiontem (ion s opačným nábojem), pokud chceme udržovat neutralitu tohoto systému. V tomto případě, pokud je protiion kation, pojmenujeme systém jako katexovou pryskyřici. Pokud je však protiiion anion, je systém pryskyřice pro výměnu aniontů.

V procesu iontové výměny je pět hlavních fází;

1. Počáteční fáze
2. Adsorpce cíle
3. Zahájení eluce
4. Konec eluce
5. Regenerace

Jaký je rozdíl mezi afinitou a iontoměničovou chromatografií?

Afinitní chromatografie je biochemická technika, kterou používáme k oddělení složek ve směsi v závislosti na interakcích mezi těmito složkami, zatímco iontová chromatografie je formou kapalinové chromatografie, ve které můžeme analyzovat iontové látky. Proto je hlavní rozdíl mezi afinitní a iontoměničovou chromatografií v tom, že ionexovou chromatografii můžeme použít pouze pro separaci iontových látek, zatímco afinitní chromatografie je schopna separovat jak nabité, tak i nenabité částice. Při uvažování pracovního principu je rozdíl mezi afinitní a iontoměničovou chromatografií v tom, že afinitní chromatografie probíhá v důsledku skutečnosti, že cílové molekuly mají vysokou afinitu pro stacionární fázi. Avšak pro iontoměničovou chromatografii mají cílové molekuly opačný náboj než povrch stacionární fáze.

Níže uvedený infographic představuje rozdíl mezi afinitou a iontoměničovou chromatografií jako srovnání vedle sebe.

Shrnutí - afinita vs. iontoměničová chromatografie

Souhrnně lze říci, že afinitní a iontoměničová chromatografie jsou dvě formy technik kapalinové chromatografie. Klíčovým rozdílem mezi afinitní a iontoměničovou chromatografií je to, že můžeme použít afinitní chromatografii k oddělení nabitých nebo nenabitých složek ve směsi, zatímco můžeme použít iontoměničovou chromatografii k oddělení nabitých složek ve směsi.

Odkaz:

1. „Afinitní chromatografie“. Wikipedia, Wikimedia Foundation, 5. října 2018. K dispozici zde 
2. Libretexty. "Iontoměničová chromatografie." Chemistry LibreTexts, Libretexts, 29. prosince 2016. K dispozici zde  

Obrázek se svolením:

1. „Niklová pryskyřice“ od Pdcook - vlastní práce, (CC BY-SA 3.0) přes Commons Wikimedia 
2. „Iex“ autorem Daliak (Public Domain) prostřednictvím Commons Wikimedia