Rozdíl mezi Bradfordovým a Lowry Proteinovým testem

klíčový rozdíl mezi testem bradford a lowry protein je to Bradfordův proteinový test je založen na posunu absorbance barviva Coomassie brilantní modré G-250, zatímco Lowryho proteinový test je založen na reakci iontů mědi (Cu +) iontů produkovaných oxidací peptidových vazeb s Folin-Ciocalteu činidlem.

Test je analytická technika, která pomáhá charakterizovat hlavní funkční složky vzorku. Z tohoto důvodu může být test buď kvalitativní, nebo kvantitativní. Mnoho oborů včetně laboratorního lékařství, farmakologie, biologie životního prostředí, molekulární biologie, biochemie a imunologie používá tento druh testů rutinně. Bradfordův a Lowryův proteinový test jsou dva biochemické testy, které určují koncentraci proteinu v roztoku vzorku. Oba testy používají kolorimetrické techniky k získání výsledků.

OBSAH

1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je test Bradfordovy bílkoviny
3. Co je Lowry Protein Assay
4. Podobnosti mezi Bradfordovým a Lowry Proteinovým testem
5. Porovnání bok po boku - Bradford vs. Lowry Protein Assay ve formě tabulky
6. Shrnutí

Co je Bradfordův proteinový test?

Bradfordův proteinový test je rychlý spektroskopický analytický postup pro analýzu proteinů. Ukazuje vysokou přesnost při měření koncentrace proteinu v roztoku. Marion Bradford zavedl tento postup v roce 1976. V tomto testu je celková reakce založena na naměřeném složení aminokyselin proteinů. Jinými slovy, Bradfordův proteinový test je kolorimetrický test. Používá barvivo Coomassie brilantní modrou. Tento kolorimetrický proteinový test tedy závisí na posunu absorbance barviva. Coomassie brilantní modrá G-250 existuje ve třech formátech: kationtová (červená), aniontová (modrá) a neutrální (zelená). Během kyselých podmínek se červená forma barviva převede na modrou. Potvrzuje vazbu proteinu. Pokud protein není přítomen, může roztok zůstat v hnědé barvě.

Obrázek 01: Bradfordův proteinový test

Bradfordův proteinový test se liší od jiných proteinových testů, protože je méně citlivý na interference různých chemických sloučenin přítomných v proteinovém roztoku. Tyto sloučeniny zahrnují sodík, draslík, glukózu a sacharózu atd.

Co je Lowry Protein Assay?

Test s nízkými proteiny je biochemický test, který se používá ke stanovení celkové hladiny proteinu v roztoku. Oliver H. Lowry je osoba, která vyvinula toto činidlo v roce 1940. Postup zobrazuje celkovou koncentraci proteinu v roztoku změnou barvy, která je úměrná koncentraci proteinu v roztoku. Toto je tedy také kolorimetrický proteinový test.

Základem tohoto postupu je reakce mezi měděnými ionty (Cu +) vznikající oxidací peptidových vazeb a Folin-Ciocalteuho činidla. Toto činidlo také obsahuje kyselinu fosfomolybdenovou a kyselinu fosforečnou-wolframovou. Mechanismus reakce testu Lowryho proteinu však není dobře znám. Zahrnuje však oxidaci cysteinových, tryptofanových a tyrosinových zbytků redukcí Folin-Ciocalteuova činidla.

Obrázek 02: Stanovení proteinů Lowry

Cysteinové zbytky přispívají k absorbci pozorované v testu Lowryho proteinu a reakce vede k brilantní modré molekule; heteropoly molybdenová modrá. Redukce této molekuly se měří absorbancí při 660 nm. Koncentrace cysteinových a tryptofanových zbytků, které snižují Folin-Ciocalteuovo činidlo, tedy odvozuje celkovou koncentraci proteinu v roztoku.

Jaké jsou podobnosti mezi Bradfordem a Lowry Protein Assay?

• Stanovení proteinů v roztoku stanoví Bradford a Lowry.
• Obě metody jsou kolorimetrické.
• Citlivost obou metod je také vysoká.

Jaký je rozdíl mezi Bradfordovým a Lowry Protein Assay?

Bradfordův a Lowryův proteinový test jsou dva typy testů, které určují koncentraci proteinu v roztoku. Bradfordův proteinový test se spoléhá na posun absorbance barviva Coomassie brilantní modři G-250, zatímco Lowryho proteinový test závisí na reakci iontů mědi produkovaných oxidací peptidových vazeb s Folin-Ciocalteu činidlem. To je klíčový rozdíl mezi testem na Bradfordově a Lowrym. Stanovení proteinů v Bradfordu trvá 15 minut, zatímco výsledek testu s proteinem Lowery trvá 40–60 minut. Jedná se tedy o další rozdíl mezi analýzou Bradfordova a Lowryho proteinu. Dále, Bradfordův proteinový test je závislý na složení aminokyselin, zatímco Lowryho proteinový test je částečně závislý na složení aminokyselin. To je tedy také rozdíl mezi analýzou Bradfordova a Lowryho proteinu.

Níže inforaphic poskytuje více podrobností o rozdílu mezi Bradfordovým a Lowry proteinovým testem.

Shrnutí - Bradford vs Lowry Protein Assay

Test je analytická technika používaná k charakterizaci hlavní funkční složky vzorku. Bradfordův a Lowryův proteinový test jsou dva typy proteinových testů, které fungují kolorimetrickými technikami. Koncentrace proteinů v roztoku určují jak Bradfordovy, tak Lowryho proteinové testy. Hlavní rozdíl mezi Bradfordovým a Lowry Protein Assayem však spočívá v kolorimetrické metodě, kterou používají. Bradfordův proteinový test používá Coomassie brilantní modrou G-250, zatímco Lowryho proteinový test používá ionty mědi (Cu +) a Folin-Ciocalteuovo činidlo. Kromě toho poskytuje Bradfordova metoda rychlé výsledky než test Lowryho proteinu. Obě metody jsou však vysoce citlivé a podléhají rušení z různých látek.

Odkaz:

1. „Kanadský deník botaniky.“ Canadian Journal of Botanany - 60 (7): 1046 - PDF, k dispozici zde.
2. „Chemická analýza proteinů“. Thermo Fisher Scientific - USA, k dispozici zde.

Obrázek se svolením:

1. „Bradfordův proteinový test“ Helito - vlastní práce (CC BY-SA 4.0) přes Commons Wikimedia