Rozdíl mezi přímým a nepřímým testem ELISA

Klíčový rozdíl - přímý vs. nepřímý test ELISA

Enzymaticky vázaný imunotest (ELISA), známý také jako enzymový imunotest, je sérologický test, který detekuje protilátky v krvi. Používá se jako diagnostický nástroj ke zjištění, zda byl pacient vystaven určitému typu viru nebo jinému infekčnímu agens (antigen) a zda tělo vytvořilo protilátky proti infekci. ELISA může také identifikovat minulé a současné infekce. ELISA se proto často používá jako předběžný screening lékaři před hloubkovou analýzou nemocí. Tento test lze provést v laboratoři odebráním vzorku krve od pacienta. Existují dva typy testu ELISA: přímý test ELISA a nepřímý test ELISA. Klíčový rozdíl mezi přímým a nepřímým testem ELISA je ten nepřímá ELISA je citlivější a vyžaduje přidání sekundární protilátky zatímco přímá ELISA je méně citlivý a používá pouze primární protilátku.

OBSAH
1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je to přímá ELISA
3. Co je nepřímá ELISA
4. Porovnání bok po boku - přímý vs. nepřímý test ELISA
5. Shrnutí

Co je Direct ELISA?

ELISA je diagnostický test nemoci prováděný za účelem identifikace přítomnosti konkrétních antigenů nebo protilátek v krvi. Provádí se jako test na destičce. Používá protilátky spojené se snadno testovanými enzymy. Přítomnost antigenů ve vzorku séra se váže na specifické protilátky spojené s enzymy. V posledním kroku se přidá specifický substrát, který reaguje s enzymem. Enzym převádí substrát na barevný produkt nebo produkt produkující signál. Změna barvy v chemickém substrátu odhaluje přítomnost konkrétní protilátky ve vzorku séra. Přímý test ELISA používá pouze primární protilátku spojenou s enzymem. Po navázání na antigen rychle mění barvu, což ukazuje na přítomnost infekčního agens v krvi. Intenzita signálů je však v přímé ELISA slabší, protože epitopy jsou omezeny na navázání antigenů. Přímý test ELISA je tedy ve srovnání s nepřímým testem ELISA méně citlivý.

Obrázek 01: Přímý test ELISA

Co je nepřímá ELISA?

ELISA může být provedena s použitím dvou typů protilátek; primární protilátka a sekundární protilátka. Nepřímý nástroj ELISA používá oba typy protilátek k zesílení signálů pro lepší detekci. Nepřímá technika ELISA se provádí následujícím způsobem.

Destičky se inkubují s antigeny a promyjí se, aby se blokovala nespecifická vazba.
Poté se přidají primární protilátky a promyjí se.
Přidají se enzymatické sekundární protilátky a promyjí se.
Přidá se substrát a nechá se reagovat s enzymy.
Jsou detekovány signály a je identifikována přítomnost nebo nepřítomnost specifického antigenu ve vzorku.

V nepřímém testu ELISA se několik sekundárních protilátek může vázat na jednu primární protilátku. Sekundární protilátky jsou spojeny s snadno testovanými enzymy. Proto jedna vazba může vytvořit silný signál kvůli více než jedné interakci. Proto je nepřímá ELISA citlivější než přímá ELISA. Nepřímá ELISA však může vydávat nespecifické signály v důsledku zkřížených reakcí sekundárních protilátek.

Obrázek 02: Nepřímý test ELISA

Jaký je rozdíl mezi přímým a nepřímým testem ELISA?

Přímý vs nepřímý test ELISA
Přímý test ELISA je ve srovnání s nepřímým testem ELISA méně citlivý.	Nepřímá ELISA je citlivější.
Čas odebrán
Přímý test ELISA je rychlý proces.	Nepřímá ELISA je časově náročná.
Použití protilátek
V přímém testu ELISA se používá pouze jeden typ protilátek (primární protilátky).	Primární a sekundární protilátky se používají pro nepřímou ELISA.
Spojení s enzymy
Primární protilátky jsou spojeny s enzymy.	Sekundární protilátky jsou spojeny s enzymy.
Křížová reaktivita druhých protilátek
Přímý test ELISA eliminuje zkříženou reaktivitu druhých protilátek.	Nepřímá ELISA je ovlivněna zkříženou reaktivitou druhých protilátek.
Signály
Signály jsou ve srovnání s nepřímým testem ELISA slabé.	Signály jsou zesíleny nepřímou ELISA. Proto je snadné detekovat.

Shrnutí - Přímý vs. Nepřímý test ELISA

ELISA je biochemická technika používaná hlavně v imunologii k detekci přítomnosti protilátky nebo antigenu ve vzorku krve pacienta. Může být provedeno dvěma procesy známými jako přímá nebo nepřímá ELISA. Přímý test ELISA používá k detekci antigenu pouze primární protilátky, zatímco nepřímý test ELISA používá primární i sekundární protilátky. V přímé ELISA jsou primární protilátky značeny, zatímco v nepřímé ELISA jsou značeny sekundární protilátky. To je rozdíl mezi přímým a nepřímým testem ELISA.

Reference
1. "Enzymaticky vázaný imunosorbentový test (ELISA)." Bulletin Světové zdravotnické organizace. U.S. National Library of Medicine, 1976. Web. 29.03.2017
2. Loon, A. M. van, J. T. Van Der Logt, F. W. Heessen a J. Van Der Veen. „Enzymově vázaný imunosorbentový test, který používá značený antigen pro detekci imunoglobulinových protilátek M a A v toxoplasmóze: srovnání s nepřímou imunofluorescencí a imunosorbentem vázaným na enzymy s dvojitým sendvičem.“ Žurnál klinické mikrobiologie. U.S. National Library of Medicine, červen 1983. Web. 29.03.2017

Obrázek se svolením:
1. „ELISA diagram“ od Cavitri - vlastní práce (CC BY 3.0) přes Commons Wikimedia
2. „Nepřímá ELISA“ od Cawang - vlastní práce (CC0) přes Commons Wikimedia

Věda a příroda