Rozdíl mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí

klíčový rozdíl mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí je to přímá imunofluorescence používá jednu protilátku, která působí proti cílovému cíli, zatímco nepřímá imunofluorescence používá dvě protilátky k označení cílového cíle.

Imunofluorescence nebo zobrazení buněk je technika, která se používá k označení specifického cílového antigenu fluoroforem. Fluorofor je zde fluorescenční chemická sloučenina, která může po excitaci světla znovu emitovat světlo. Když se fluorofor váže na cílový antigen, umožňuje detekci cílové molekuly ve vzorku. K dalšímu popisu, když se antigen váže na specifickou protilátku, může být konjugován s fluorofory. Při pozorování pod fluorescenčním mikroskopem je tedy snadné detekovat přítomnost cílového antigenu ve vzorku.

Kromě toho existují dva typy imunofluorescence; přímá a nepřímá imunofluorescence. Rozdíl mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí spočívá hlavně v počtu použitých protilátek a konjugaci fluoroforů. To znamená, že v přímé imunofluorescenci se fluorofor přímo konjuguje s primární protilátkou, zatímco v nepřímé imunofluorescenci se fluoroforový konjugát se sekundární protilátkou.

OBSAH

1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je přímá imunofluorescence
3. Co je nepřímá imunofluorescence
4. Podobnosti mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí
5. Srovnání bok po boku - přímá vs. nepřímá imunofluorescence v tabulkové formě
6. Shrnutí

Co je přímá imunofluorescence?

Imunofluorescence používá protilátky k detekci specifických cílových antigenů. Přímá imunofluorescence je jedním ze dvou typů imunofluorescence. V přímé imunofluorescenci jediná protilátka (primární protilátka) zahrnuje a fluorofor přímo konjuguje s primární protilátkou. Po navázání protilátky na cílový antigen emituje fluorofor fluorescenci, kterou lze detekovat fluorescenčním mikroskopem.

Obrázek 01: Přímá imunofluorescence

Přímá imunofluorescence je však nákladná metoda, protože primární konjugované protilátky jsou nákladné ve srovnání se sekundárními protilátkami. Neznamená to však žádný další krok, tedy kratší techniku. Kromě toho jsou nespecifické vazby sníženy v přímé imunofluorescenci. Proto je zkřížená reaktivita druhů nízká. Při detekci je však citlivost přímé imunofluorescence slabá ve srovnání s nepřímou imunofluorescencí .

Co je nepřímá imunofluorescence?

Nepřímá imunofluorescence je druhým typem imunofluorescence, která zahrnuje dva typy protilátek, jako jsou primární a sekundární protilátky, při značení cílového antigenu. V této metodě se fluorofor konjuguje se sekundární protilátkou. Tato technika tedy zahrnuje další krok.

Obrázek 02: Imunofluorescence

Citlivost je však u této metody vysoká, protože několik fluoroforů může být konjugováno se sekundárními protilátkami a usnadňuje detekci. Kromě toho je nepřímá imunofluorescence levnější kvůli skutečnosti, že konjugace sekundárních protilátek je levnější a snadnější. Ve srovnání s přímou imunofluorescencí je druhová zkřížená reaktivita v nepřímé metodě vysoká.

Jaké jsou podobnosti mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí?

• Jsou to dva typy imunofluorescenční techniky.
• Primární protilátky a fluorofor zahrnují obě metody.
• Reakce antigen-protilátka také probíhá v obou metodách.
• Kromě toho přímá i nepřímá imunofluorescence využívá fluorescenční mikroskop pro detekci antigenu.

Jaký je rozdíl mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí?

Imunofluorescence může být přímá nebo nepřímá na základě konjugace fluoroforu s použitými protilátkami. V přímé imunofluorescenci se fluorofor konjuguje s primární protilátkou, což je jediná protilátka, která se účastní této techniky. Na rozdíl od toho, v nepřímé imunofluorescenci se fluorofor konjuguje se sekundární protilátkou, což je jedna ze dvou typů protilátek, které se účastní této techniky. Hlavním rozdílem mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí je tedy typ protilátky, který se konjuguje s fluoroforem.

Následující infographic poskytuje vedle sebe srovnání rozdílu mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí.

Shrnutí - přímá vs nepřímá imunofluorescence

Imunofluorescence je technika, která se používá k detekci přítomnosti specifických antigenů ve vzorku. Tato technika používá specifické protilátky. Protilátky se proto spojují s fluorofory, aby je detekovaly pomocí fluorescenčního mikroskopu. Navíc existují dva typy imunofluorescence, a to přímá a nepřímá imunofluorescence. Přímá imunofluorescence zahrnuje jednu protilátku a fluorofor přímo konjugovaný s touto protilátkou. Nepřímá imunofluorescence zahrnuje dvě protilátky; primární a sekundární a fluorofor konjugovaný k sekundární protilátce. Protože se několik sekundárních protilátek může vázat s primární protilátkou a několik fluorofórů se může konjugovat se sekundárními protilátkami, nepřímá imunofluorescence je citlivější než přímá metoda. Kromě toho je nepřímá metoda levnější než metoda přímá. To je tedy rozdíl mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí.

Odkaz:

1. „Imunofluorescence.“ Wikipedia, Wikimedia Foundation, 19. srpna 2018. K dispozici zde 

Obrázek se svolením:

1. „HSP IF IgA“ od Emmanuelma na en.wikipedia, (CC BY 3.0) přes Commons Wikimedia
2. „Imunofluorescence“ od Westhayl618 - vlastní práce, (CC BY-SA 4.0) přes Commons Wikimedia