Rozdíl mezi imunofluorescencí a imunohistochemií

Klíčový rozdíl - imunofluorescence vs. imunohistochemie
 

Diagnostika nemocí, která využívá molekulárně biologických metod, se stala rozvíjející se oblastí technologie klinické laboratoře. Zahrnuje všechny testy a metody identifikace nemoci a pochopení příčiny nemoci analýzou DNA, RNA nebo exprimovaných proteinů v organismu. Rychlý pokrok v molekulární diagnostice umožnil základní výzkum přenosných a nepřenosných nemocí. Používají se ke stanovení změn v sekvenčních nebo expresních hladinách v klíčových genech nebo proteinech zapojených do nemoci. Imunofluorescence (IF) a imunohistochemie (IHC) jsou dvě takové široce používané techniky v biologii rakoviny. IF je typ IHC, kde se k analýze monoklonálních a polyklonálních protilátek používá metoda detekce fluorescence, zatímco IHC používá k detekci monoklonálních a polyklonálních protilátek metody založené na chemikáliích. Toto je klíčový rozdíl mezi IF a IHC.

OBSAH

1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je imunofluorescence 
3. Co je imunohistochemie
4. Podobnosti mezi imunofluorescencí a imunohistochemií
5. Porovnání bok po boku - imunofluorescence vs. imunohistochemie v tabulkové formě
6. Shrnutí

Co je imunofluorescence (IF)?

Imunofluorescence je detekční technika, kde protilátky použité v testu jsou značeny pomocí fluorescenčních barviv nebo fluorescenčních proteinů pro účely detekce. Označené sekundární protilátky mohou vést k nežádoucím signálům na pozadí; proto je technika IF založena na značení samotné primární protilátky v současné době, aby se zabránilo nežádoucím signálům během detekce. Touto technikou je zabráněno nespecifické vazbě mezi primární a sekundární protilátkou a je rychlejší, protože není zahrnut žádný sekundární inkubační krok. Rovněž se zlepší kvalita dat.

Obrázek 01: Dvojité imunofluorescenční barvení pro BrdU, NeuN a GFAP

Fluorochromy nebo fluorescenční barviva jsou sloučeniny, které mohou absorbovat záření, výhodně ultrafialové záření, které je excitováno. Když částice dosáhnou základního stavu z excitovaného stavu, vyzařují záření, které je zachyceno a detekováno detektorem pro vytvoření spektra. Je velmi důležité, aby fluorescenční značka byla kompatibilní a stabilní pro konkrétní reakci a měla by být správně konjugována s protilátkou, aby se získaly přesné výsledky. Jedním z nejpoužívanějších fluorochromů je fluorescein isothiokyanát (FITC), který je zelené barvy, s absorpční a emisní špičkovou vlnovou délkou 490 nm a 520 nm. Rhodamin, další činidlo používané v IF, je červené barvy a má zřetelné absorpční a emisní vrcholové vlnové délky 553 nm a 627 nm.

Co je imunohistochemie (IHC)?

IHC je metoda molekulárního testování prováděná za účelem identifikace a potvrzení přítomnosti antigenu v cílové buňce. Cílovou buňkou může být infekční částice, mikrobiální patogen nebo maligní nádorová buňka. IHC používá monoklonální a polyklonální protilátky ke stanovení přítomnosti antigenů přítomných na buněčném povrchu cílových buněk. Tato technika je založena na vazbě antigen-protilátka. Detekční marker je konjugován s těmito protilátkami za účelem detekce přítomnosti nebo nepřítomnosti konkrétního antigenu. Tyto markery mohou být chemické markery, jako jsou enzymy, fluorescenčně značené protilátky nebo radioaktivně značené protilátky.

Obrázek 02: Plátek myší a mozku barvený imunohistochemicky

Nejoblíbenější aplikací IHC je biologie rakovinných buněk k identifikaci přítomnosti maligních nádorů, ale používá se také k detekci infekčních chorob..

Jaké jsou podobnosti mezi imunofluorescencí a imunohistochemií?

• Imunofluorescence a imunohistochemie probíhá za podmínek in vitro.
• Obě techniky jsou založeny na antigen-protilátka
• Oba jsou velmi rychlé techniky.
• Výsledky technik jsou reprodukovatelné.
• Oba zlepšili kvalitu dat.
• Tyto techniky se používají v diagnostice rakoviny a infekčních chorob.

Jaký je rozdíl mezi imunofluorescencí a imunohistochemií?

Imunofluorescence vs. imunohistochemie
IF je detekční technika, kde protilátky použité v testu jsou značeny pomocí fluorescenčních barviv nebo fluorescenčních proteinů pro detekci.	IHC je detekční technika, kde protilátky použité v testu jsou značeny pomocí chemikálií nebo radioaktivních prvků pro detekci.
Přesnost
Přesnost je vyšší v technice IF ve srovnání s IHC.	Přesnost je v IHC nižší.
Specifičnost
IF je konkrétnější.	IHC je méně specifický.

Shrnutí - Imunofluorescence vs. imunohistochemie

Molekulární mechanismy přinesly mnoho změn v oblasti medicíny, což vedlo k pokročilým metodám molekulárního testování, které přinesly revoluce v oblasti diagnostiky. Tyto vynálezy vedly k rychlé a přesné identifikaci a potvrzení nemoci, což umožnilo úspěšné podávání a výrobu léčiv. Tyto techniky se také používají ve farmakologii, aby se zjistily cíle léčiv a potvrdily se farmakokinetické vlastnosti léčiva během metabolismu léčiv. IF a IHC jsou dvě diagnostické metody, které jsou založeny na koncepci vazby antigenu a protilátky, ačkoli se způsob detekce u obou technik liší. IF používá princip fluorescence k detekci antigenu a IHC používá koncept chemické konjugace k detekci antigenu. To je rozdíl mezi IF a IHC.

Stáhněte si PDF verzi imunofluorescence vs imunohistochemie

Můžete si stáhnout PDF verzi tohoto článku a použít ji pro účely offline podle citace. Stáhněte si PDF verzi zde Rozdíl mezi imunofluorescencí a imunohistochemií.

Reference:

1. Aoki, Valéria, et al. "Přímá a nepřímá imunofluorescence." Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, k dispozici zde. Přístup k 25. srpnu 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha, et al. "Aplikace imunohistochemie." Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, srpen 2012, k dispozici zde. Přístup k 25. srpnu 2017.

Obrázek se svolením:

1. „Dvojité imunofluorescenční barvení pro BrdU, NeuN a GFAP“ Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2., Liu X. - Intranazální dodání transformujícího růstového faktoru - beta1 u myší po mrtvici snižuje objem infarktu a zvyšuje neurogenezi v subventrikulární zóně; PMID 19077183 (CC BY 2.0) prostřednictvím Commons Wikimedia
2. „Hypothalamus tkáně myši barvené ABC-imunohistochemií“ Zabbn - vlastní práce (CC BY-SA 3.0) přes Commons Wikimedia