Rozdíl mezi nitrocelulózou a nylonovou membránou

Klíčový rozdíl - nitrocelulóza vs. nylonová membrána
 

Blotování je důležitá technika pro detekci specifických sekvencí DNA, RNA a proteinů z jejich směsí v molekulární biologii. To se provádí pomocí membrány zvané blot. Existují různé techniky přenosu, jako je severní, jižní a západní přenos. Výběr správné membrány pro proces blotování by měl být pečlivě proveden, aby se zabránilo nespecifické vazbě a nesprávné detekci. Nitrocelulóza, nylon a PVDF jsou běžně používané membrány v blotovacích technikách. Mají různé vlastnosti. Klíčovým rozdílem mezi nitrocelulózou a nylonovou membránou je to nitrocelulózové membrány mají vysoký potenciál imobilizace proteinů zatímco nylonové membrány mají vysoký potenciál imobilizace nukleových kyselin. Oba techniky membrán se však často používají v technikách blotování.

OBSAH
1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je to nitrocelulózová membrána
3. Co je to nylonová membrána
4. Porovnání vedle sebe - nitrocelulóza vs. nylonová membrána
5. Shrnutí

Co je nitrocelulózová membrána?

Nitrocelulózová membrána je běžně používaný membránový filtr v technikách nukleových kyselin a proteinů. Má vysoký vazebný potenciál na proteiny. Nitrocelulózové membrány jsou proto široce používány v technikě westernového přenosu. Nitrocelulózové membrány jsou kompatibilní se všemi hybridizačními technikami a vykazují vynikající vazebné kapacity bez rušení. Nitrocelulózové membrány jsou přirozeně hydrofilní povahy. Vytvářejí hydrofilní interakce s molekulami a účinně je imobilizují na membránu. Komerční nitrocelulózové membrány jsou dostupné ve dvou velikostech pórů: 0,45 a 0,2 um.

Obrázek 01: Nitrocelulózová membrána použitá při westernovém přenosu

Co je to nylonová membrána?

Nylonová membrána je dalším typem komerční membrány používané v blotovacích technikách. Alternativně se používá s nitrocelulózovými membránami pro jižní a severní přenos. Nylonové membrány jsou ideální pro Southern blotting než nitrocelulóza díky jejich vysoké afinitě k vazbě na DNA. Vzhledem k několika jedinečným vlastnostem nylonových membrán vědci běžně používají nylonové membrány pro jižní a severní přenos, namísto přes nitrocelulózovou membránu. Na rozdíl od nitrocelulózy se nylonové membrány také doporučují pro stripování a opakované sondování.

Obrázek 02: Nylonová membrána použitá pro Southern blotting

Jaký je rozdíl mezi nitrocelulózou a nylonovou membránou??

Nitrocelulóza vs. nylonová membrána
Nitrocelulózové membrány jsou křehké.	Nylonové membrány jsou méně křehké.
Zacházení
Je těžké s nimi manipulovat.	Snadno se s nimi manipuluje.
Znovuobjevování
Nepodporované nitrocelulózové membrány se těžko reprobe.	Opakované zkoušení je u nylonových membrán snadné.
Kompatibilita s různými podmínkami skladování
Nitrocelulózové membrány mají menší sílu, aby vydržely různé podmínky skladování.	Nylonové membrány odolněji reagují na různé podmínky skladování.
Použití
Vyžaduje se předběžné smáčení.	U nylonových membrán není vyžadováno předvlhčení.
Hydrofilní příroda
Nitrocelulózové membrány jsou hydrofilní povahy, ale jsou méně hydrofilní než nylonové membrány.	Jsou svou povahou vysoce hydrofilní.
Potenciál imobilizace
Nitrocelulózové membrány mají menší afinitu k nukleovým kyselinám. Má však vysokou afinitu k proteinům.	Nylonové membrány mají s nukleovými kyselinami vysoký vazebný potenciál než nitrocelulózové membrány.

Shrnutí - Nitrocelulóza vs. Nylonová membrána

Nitrocelulózové a nylonové membrány jsou speciální fólie používané v blotovací technice k reprodukci vzoru pruhů na gelu. Umožňují detekci specifické sekvence nebo proteinu ze směsí jejich imobilizací na membráně. Jakmile jsou molekuly imobilizované na membráně, mohou být použity jako substrát pro hybridizační analýzu se značenými sondami. Nitrocelulózová membrána se běžně používá pro detekci proteinů technikou westernového přenosu, a to z důvodu její vysoké vazebné afinity k proteinům. Nylonové membrány se často používají pro jižní a severní přenos. To je rozdíl mezi nitrocelulózou a nylonovou membránou.

Reference:
1. Hayes, P. C., C. R. Wolf, a J. D. Hayes. "Blotovací techniky pro studium DNA, RNA a proteinů." BMJ: British Medical Journal. US National Library of Medicine, 14. října 1989. Web. 07 Duben 2017
2. Mahmood, Tahrin a Ping-Chang Yang. "Western Blot: technika, teorie a řešení problémů." North American Journal of Medical Sciences. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, září 2012. Web. 07 Duben 2017

Obrázek se svolením:
1. „Western blot transfer“ By Bensaccount na anglické Wikipedii (CC BY 3.0) prostřednictvím Commons Wikimedia