Rozdíl mezi nitrocelulózou a PVDF

Klíčový rozdíl - nitrocelulóza vs. PVDF
 

Western blotting je metoda, která umožňuje detekci a kvantifikaci specifických proteinů ze vzorku proteinu. Spolehlivost techniky závisí na výběru správné membrány pro absorpci proteinů z gelu. Existují různé typy mikroporézních membrán. Nitrocelulózové a PVDF membrány jsou dvě takové membrány, které vědci upřednostňují kvůli jejich zvláštním vlastnostem před ostatními typy membrán. Výběr mezi nitrocelulózou nebo PVDF je také další výzvou při westernovém přenosu. Nitrocelulóza i PVDF mají vysokou absorpční kapacitu pro proteiny. Klíčovým rozdílem mezi nitrocelulózou a PVDF membránou je to nitrocelulózové membrány nemají schopnost stripovat protilátky a znovu použít membránu pro opakované testování protilátek, zatímco PVDF membrány mají stripovací a opětovné použití.

OBSAH
1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je nitrocelulóza
3. Co je PVDF
4. Srovnání bok po boku - nitrocelulóza vs. PVDF
5. Shrnutí

Co je nitrocelulóza?

Nitrocelulóza je polymer vyráběný zpracováním celulózy kyselinou dusičnou a používá se k výrobě mikroporézních membrán v molekulární biologii, zejména pro techniky blotování, jako je jižní, severní a západní blotování. Velikosti pórů nitrocelulózových membrán se pohybují od 3 do 20 um. Nitrocelulózové mikroporézní membrány usnadňují detekci imunochemické reakce na povrchu membrány. Nitrocelulózové membrány se proto často používají pro imobilizaci proteinů a detekci specifických proteinů při westernovém přenosu. Nitrocelulózové membrány mohou také imobilizovat glykoproteiny a nukleové kyseliny.

Nitrocelulózové membrány jsou výhodné v laterálních průtokových testech kvůli několika vlastnostem. Nitrocelulózové membrány absorbují proteiny ve vysoké koncentraci. Rozpouštědlo použité pro navlhčení membrány nesnižuje absorpci nitrocelulózového membránového proteinu. Nitrocelulózové membrány lze snadno rozřezat na požadovanou velikost gelu a přenést proteiny z gelu na membránu elektrickým nebo kapilárním přenosem. Nitrocelulóza umožňuje rychlejší tok proteinů membránou s vysokým vazebným potenciálem. Nitrocelulóza vykazuje zlepšenou pevnost při manipulaci. Dalším zvláštním atributem nitrocelulózové membrány je to, že může být snadno nalepeno s vodou nerozpustnými lepidly na různé plastové podklady..

Obrázek 01: Nitrocelulózová membrána pro westernový přenos

Co je PVDF?

Polyvinyliden difluorid (PVDF) je fluorpolymer produkovaný polymerací vinylidendifluoridu a má vysokou schopnost imobilizace proteinů. Proto se mikroporézní membrány vyrobené z PVDF používají v technikách westernového přenosu k analýze specifických proteinů ze směsí proteinů. Membrány PVDF lze také použít pro analýzu aminokyselin a sekvenování proteinů. Nejdůležitější charakteristikou PVDF membrány nad nitrocelulózovou membránou je, že může být snadno odstraněna z protilátek a znovu použita pro následné protilátkové sondy..

Membrány PVDF jsou silnější než nitrocelulózové membrány; Odolnější vůči poškození během opakovaného použití. Membrány PVDF jsou vysoce hydrofobní. Proto musí být před použitím namočeny v methanolu nebo isopropanolu.

Jaký je rozdíl mezi nitrocelulózou a PVDF?

Nitrocelulóza vs. PVDF
Nitrocelulóza je polymer složený z celulózy.	PVDF je fluorpolymer vyráběný polymerací vinylidendifluoridu.
Velikost pórů membrány
Typické velikosti pórů jsou 0,1, 0,2 nebo 0,45μ	Typické velikosti pórů jsou 0,1, 0,2 nebo 0,45 um
Vazebná kapacita proteinu
Nitrocelulóza má vazebnou kapacitu proteinu 80 až 100 μg / cm2.	PVDF má vazebnou kapacitu proteinu 170 až 200 μg / cm2.
Citlivost
To má ve srovnání s PVDF nízkou citlivost.	To má vysokou citlivost.
Detekce proteinů s nízkou expresí
Protože citlivost je nízká u nitrocelulózových membrán, není vhodná pro detekci málo exprimovaných proteinů.	To je vhodnější pro detekci nízko exprimovaných proteinů díky vysoké citlivosti.
Hluk v pozadí
To má nižší šum na pozadí	To má vyšší šum na pozadí.
Interakce s proteiny
Proteinové molekuly se vážou k nitrocelulózovým membránám prostřednictvím hydrofobních interakcí.	Proteiny se vážou na PVDF membrány prostřednictvím hydrofobních a dipólových interakcí.
Povaha membrány
Nitrocelulóza je křehká a křehká. Dostupné jsou však verze nitrocelulózy a jsou odolné.	PVDF je odolnější a má vyšší chemickou odolnost.
Schopnost strhnout a znovu použít
Nitrocelulóza může mít potíže se stripováním a opakovaným pokusem bez ztráty signálu.	PVDF je ideální pro opakované aplikace a sekvenční aplikace.
Vhodnost
Nitrocelulóza je ideální pro detekci nízkomolekulárních proteinů.	PVDF je vhodnější pro detekci proteinů s vyšší molekulovou hmotností.
Jiná použití
Nitrocelulóza může být použita pro analýzu nukleových kyselin a blotování dot / slot.	PVDF lze použít pro proteinové sekvenování a systémy pro stanovení na pevné fázi.
Náklady
To je levnější než PVDF membrány.	To je dražší než nitrocelulózové membrány.
Potřeba předmočení
Nitrocelulózové membrány nevyžadují předběžné zpracování methanolem	Membrány PVDF vyžadují předběžné zpracování methanolem.

Shrnutí - Nitrocelulóza vs. PVDF

Nitrocelulózové membrány byly první membrány komerčně používané pro stanovení laterálního toku. Mají vysokou schopnost absorbovat proteiny. Nitrocelulózové membrány se proto používají při westernovém přenosu. PVDF je další typ membrány používané při westernovém přenosu a má také vysokou absorpční kapacitu proteinu. Oba typy se používají při westernovém přenosu pro analýzu proteinů. Membrány PVDF však mají více speciálních atributů, díky čemuž jsou vhodnější než nitrocelulózové membrány pro westernový přenos. Nitrocelulózové membrány jsou však vhodnější pro detekci proteinů s nízkou molekulovou hmotností, membrány PVDF jsou vhodnější pro detekci proteinů s vysokou molekulovou hmotností. To je rozdíl mezi nitrocelulózovými a PVDF membránami.

Obrázek se svolením:
1. „Western blot transfer“ By Bensaccount na anglické Wikipedii (CC BY 3.0) prostřednictvím Commons Wikimedia

Odkaz:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun a Thomas A. Neubert. "Použití nitrocelulózových membrán pro charakterizaci proteinů pomocí hmotnostní spektrometrie s laserovou desorpcí / ionizací pomocí laserové desorpce." Analytická chemie. US National Library of Medicine, 15. července 2006. Web. 28. března 2017
2. „Molekulární markery a rostlinná biotechnologie“. Knihy Google. N.p., n.d. Web. 28. března 2017
3. pondělí, 8. dubna 2013 Tweet. "Kouzlo je v membráně: Vyberte si moudře pro výsledky Best Western Blot." Biocompare. N.p., 8. dubna 2013. Web. 28. března 2017