Rozdíl mezi PCR a PCR v reálném čase

PCR vs PCR v reálném čase

PCR nebo polymerázová řetězová reakce je revolučním objevem v moderní molekulární biologii, který byl poprvé vyvinut chemikem Karym Mullisem v roce 1983. Umožňuje pro analýzu amplifikovat jednu sekvenci v komplexní DNA. Základní myšlenka PCR je, že dva primery, které jsou komplementární s opačnými vlákny DNA sekvence, jsou orientovány vůči sobě; primery produkují komplementární řetězce, z nichž každý obsahuje druhý primer. Výsledkem je velké množství sekvence odpovídající DNA, která leží mezi dvěma primery. Enzym DNA polymerázy se používá k prodloužení primerů v PCR. DNA polymeráza je termostabilní enzym a má schopnost přežít při vysokých teplotách (94 až 95 ° C) používaných pro denaturaci templátové DNA.

PCR zahrnuje tři kroky, jmenovitě opakovaná kola denaturace, nasedání primerů a syntézu DNA. K provedení této reakce se používá termocykler, takže může být programován tak, aby rychle a přesně změnil teploty. Aplikace PCR jsou vyšetřování trestných činů, otisk DNA, detekce patogenů a analýza DNA raných lidských druhů.

Co je konvenční PCR?

Existují tři hlavní fáze konvenční PCR, a to; DNA amplifikační fáze, separace PCR a detekce produktů. Separace segmentů DNA se obvykle provádí elektroforézou na agarózovém gelu. Produkty se potom obarví etheiduim bromidem. Nakonec je detekce dosaženo vizualizací pásů na gelech pod UV světlem. Konečné výsledky konvenční PCR proto nejsou vyjádřeny jako čísla. Obvykle je běžná PCR schopna detekovat pouze jeden parametr.

Co je to PCR v reálném čase?

PCR v reálném čase může detekovat amplifikaci produktů, jak jsou produkty syntetizovány. S vývojem technologie se PCR stala velmi populární technikou, zejména pro detekci a identifikaci bakterií v potravinách. PCR v reálném čase používá fluorescenční barvicí systém a termocykler vybavený fluorescenční detekční schopností.

Jaký je rozdíl mezi konvenční PCR a PCR v reálném čase?

• Konvenční PCR je časově náročnější, protože pro analýzu amplifikovaných produktů PCR používá gelovou elektroforézu. Naproti tomu PCR v reálném čase je méně časově náročná, protože dokáže detekovat amplifikace během časných fází reakce.

• PCR v reálném čase shromažďuje data v exponenciální růstové fázi PCR, zatímco tradiční PCR shromažďuje data v koncovém bodě reakce.

• Konečné výsledky konvenční PCR nemusí být velmi přesné, ale výsledky PCR v reálném čase jsou velmi přesné.

• PCR v reálném čase je citlivější než běžná PCR.

• Konvenční PCR má velmi špatné rozlišení, zatímco real-time PCR dokáže detekovat velmi malé změny v důsledku vysokého rozlišení.

• Detekce koncového bodu konvenční PCR má krátký dynamický rozsah, zatímco detekce PCR v reálném čase má široký dynamický rozsah.

• Na rozdíl od konvenčních PCR se techniky automatizované detekce nacházejí v PCR v reálném čase.

• Konvenční PCR je vysoce sofistikovaná a pracná více než PCR v reálném čase.

• Na rozdíl od PCR v reálném čase nemůže konvenční PCR rozlišovat mezi mrtvými a živými bakteriemi.

• PCR v reálném čase používá fluorescenční barvicí systém k detekci produktů, zatímco konvenční PCR používá ethidiumbromid a UV světlo k vizualizaci pásů v agarózovém gelovém médiu.