Rozdíl mezi stránkou SDS a nativní stránkou

Key Difference - SDS Page vs Native Stránka
 

SDS a nativní stránka jsou dva typy technik elektroforézy na polyakrylamidovém gelu používané v Molecular Biology. klíčový rozdíl mezi SDS Page a Native Page je typ použitého polyakrylamidového gelu. V SDS Page se proto používá denaturační gel, molekuly se oddělí podle jejich molekulové hmotnosti. Naproti tomu v Native Page se používají nedenaturující gely. Proto jsou molekuly separovány na základě jejich velikosti, náboje a tvaru.

Polyakrylamidová gelová elektroforéza (Strana) používá gel vyrobený polymerací akrylamidových monomerů s methylenbisakrylamidem. Polyakrylamid je tvrdší a tepelně stabilnější než agaróza. Polyakrylamidové gely mají menší velikost pórů, což umožňuje účinnou separaci proteinů. Existují dva hlavní typy nastavení stránky, konkrétně SDS Page a Native Page. Stránka SDS nebo Elektroforéza na polyakrylamidovém gelu s obsahem sodíku a dodecylsulfátu odděluje proteiny na základě jejich molekulových hmotností. Denaturační gely se používají na stránce SDS. Native Page používá nedenaturující gely a separuje proteiny na základě jejich velikosti, náboje a tvaru (3D konformace).

OBSAH

1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je to SDS Page
3. Co je nativní stránka
4. Podobnosti mezi stránkou SDS a nativní stránkou
5. Porovnání bok po boku - stránka SDS vs. původní stránka v tabulkové formě
6. Shrnutí

Co je to SDS Page?

SDS Page je nejběžnější elektroforetická technika používaná k oddělení proteinů na základě jejich molekulové hmotnosti. Gel je připraven přidáním SDS (dodecylsulfát sodný), což je detergent. SDS protézy proteinů na monomery. SDS je aniontový detergent. Proto dodává proteinům čistý záporný náboj v širokém rozmezí pH. Když je na molekulu proteinu přenesen čistý záporný náboj, v důsledku kolísání náboje se složité struktury rozloží. Díky negativnímu náboji proteiny přitahují k pozitivnímu konci. Molekuly s nižší molekulovou hmotností se tedy pohybují rychleji na gelové matrici a mohou být pozorovány blízko anody, zatímco proteiny s vyšší molekulovou hmotností jsou pozorovány blíže k jamkám.

Obrázek 01: SDS Page

Vazba SDS na polypeptidový řetězec je úměrná jeho relativní molekulové hmotnosti. Molekulární hmotnost může být proto také stanovena pomocí SDS. Barvení SDS Page gelů se provádí barvením bromofenolovou modří. Aplikace stránky SDS se pohybují ve větší míře, kde lze použít k odhadu relativní molekulové hmotnosti a ke stanovení relativního množství proteinů v proteinové směsi. SDS Page lze také použít ke stanovení distribuce proteinů ve směsi proteinů. SDS Page se také používá k čištění a hodnocení proteinů. Používá se jako předběžný postup pro westernový přenos a hybridizaci, který se zase používá pro mapování a identifikaci proteinů.

Co je Native Page?

Nativní polyakrylamidová gelová elektroforéza (Native Page) používá nedenaturující gel. Proto se do gelové matrice nepřidává SDS ani jiné denaturační činidlo. V Native Page je separace proteinů založena na náboji a velikosti proteinu. Proto mobilita proteinu závisí na náboji a velikosti proteinu.

Náboj proteinu závisí na postranních řetězcích aminokyselin. Pokud jsou postranní řetězce záporně nabité, protein obdrží celkový záporný náboj a naopak. Proteiny si zachovávají 3D konformaci díky skládání. Složení je výsledkem několika typů vazeb v proteinech, jako jsou disulfidové vazby, hydrofobní interakce a vodíkové vazby. Pokud je tedy nativní stránka přenášena v neutrálním pH, proteiny budou separovány podle molekulárního tvaru proteinu. Proto lze Native Page použít jako citlivou techniku ​​k detekci změny náboje nebo konformace proteinu.

Hlavní výhodou nativní stránky je, že protein použitý pro analýzu stránky může být po analýze stránky obnoven v původním stavu, protože protein během procesu není narušen. Native Page je technika s relativně vysokou propustností a stabilita proteinu je zvýšena.

Obrázek 02: Nativní stránka

Po dokončení běhu gelu může být gel Native Page prohlížen barvením bromofenolovou modří nebo jiným vhodným barvicím činidlem. Aplikace Native Page zahrnuje separaci kyselých proteinů včetně glykoproteinů, jako je lidský rekombinantní erytropoetin, nebo identifikaci proteinů přítomných v bovinním sérovém albuminu (BSA)..

Jaké jsou podobnosti mezi stránkou SDS a nativní stránkou?

• Oba systémy SDS Page a Native Page používají polyakrylamidový gel jako matrici gelu.
• Oba se používají pro separaci a identifikaci proteinů.
• Oba používají elektroforetickou mobilitu k oddělení sloučenin.
• Obojí lze provádět svisle nebo vodorovně (většinou se provádí jako svislé nastavení stránky, protože délka běhu je větší).
• Elektroforetický přístroj včetně gelové nádrže, hřebeny, je pro provoz obou technik potřebný zdroj energie.
• Vizualizace gelu může být provedena barvicími metodami v obou technikách.

Jaký je rozdíl mezi stránkou SDS a nativní stránkou?

Stránka SDS vs Nativní stránka
Stránka SDS nebo Sodium-dodecylsulfátová stránka odděluje proteiny na základě jejich molekulové hmotnosti a používá denaturační gel.	Native Page používá nedenaturující gely a separuje proteiny na základě jejich velikosti, náboje a tvaru (3D konformace).
Typ gelu
Na SDS stránce se používá denaturační gel.	Na nativní stránce se používá nedenaturující gel.
Přítomnost BL
SDS je přítomen jako detergent, který uděluje negativní náboj vzorku na stránce SDS.	SDS není na nativní stránce.
Základ separace
Separace proteinů závisí na molekulové hmotnosti proteinu na stránce SDS.	Separace závisí na velikosti a tvaru molekuly proteinu v nativní stránce.
Stabilita proteinu
Stabilita proteinu je na stránce SDS nízká.	Stabilita proteinu je na nativní stránce vysoká.
Obnovení původního proteinu
Není to možné, protože je denaturován na stránce SDS.	Možné na nativní stránce.

souhrn - SDS Page vs Native Stránka

SDS Page a Native Page jsou dva typy technik elektroforézy na polyakrylamidovém gelu, které se používají k oddělení proteinů. Stránka SDS je ošetřena detergentem zvaným SDS. SDS uděluje proteinu celkový negativní náboj, což má za následek denaturaci proteinu. Proto jsou proteiny separovány na základě jejich molekulové hmotnosti. Naproti tomu technika Native Page nepoužívá žádné denaturační činidlo. Proteiny jsou tedy buď separovány na základě jejich velikosti nebo tvaru. Toto je rozdíl mezi stránkou SDS a nativní stránkou.

Odkaz:

1. „Princip a metoda elektroforézy na polyakrylamidovém gelu (SDS-PAGE).“ Princip a metoda elektroforézy na polyakrylamidovém gelu (SDS-PAGE) | MBL Life Sience -ASIA-. K dispozici zde
2. „Nativní gely.“ Alliance Protein Laboratories | Biofyzikální charakterizační služby. K dispozici zde  

Obrázek se svolením:

1.'SDS-PAGE Electrophoresis'Byaccount na English Wikipedia, (CC BY 3.0) přes Commons Wikimedia  
2. 'Vložte vzorek do elektroforézy na polyakrylamidovém gelu' Blaz Nemec z Lublaně ve Slovinsku (CC BY-SA 2.0) přes Commons Wikimedia