Rozdíl mezi stohovacím gelem a separačním gelem

Key Difference - Stacking Gel vs Separating Gel
 

Termíny stohovací gel a separační gel se používají při vysvětlování techniky SDS-PAGE. Elektroforéza na SDS-PAGE nebo elektroforéza na polyakrylamidovém gelu s dodecylsulfátem sodným je laboratorní technika, která se používá k oddělení molekul proteinu na základě jejich molekulové hmotnosti. Teorie techniky spočívá v tom, že proteiny s různými molekulárními hmotnostmi vykazují různé migrační rychlosti; molekuly s nízkou molekulovou hmotností migrují rychleji, zatímco molekuly s vysokou molekulovou hmotností migrují pomalu. Médiem pro migraci je gel. Existují dva typy gelů pojmenovaných jako stohovací gel a separační gel. klíčový rozdíl mezi stohovacím gelem a separačním gelem je to pH stohovacího gelu je 6,8, zatímco pH separačního gelu je 8,8.

OBSAH

1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je skládací gel
3. Co je separační gel
4. Vztah mezi stohovacím gelem a separačním gelem
5. Porovnání bok po boku - stohovací gel vs. separační gel v tabulkové formě
6. Shrnutí

Co je to stohovací gel?

Stohovací gel je nízko koncentrovaný polyakrylamidový gel, který je umístěn na vršek koncentrovanějšího štěpícího gelu (separační gel) technikou SDS-PAGE. Stohovací gel se používá ke zlepšení rozlišení elektroforézy. Rozlišení se zvyšuje kvůli rozdílu mezi koncentracemi gelového stohu a štěpícího gelu, který ovlivňuje proteiny ve vzorku. Protože koncentrace polyakrylamidu ve stohovacím gelu je nízká, je velikost pórů vyšší. To také pomáhá při zvyšování oddělení.

Skládací gel je sypký polyakrylamidový gel s velkými póry asi 7% polyakrylamidu. Tyto póry nepůsobí jako velká bariéra pro velké proteinové molekuly. Proto tento gel mírně ovlivňuje mobilitu těchto proteinů. To umožňuje separaci podle mobility a velikosti proteinu jejich koncentrací mezi dvěma gely.

Obrázek 01: SDS-PAGE akrylamidový gel

Hodnota pH stohovacího gelu je 6,8. Jeho pH je kyselé než pH štěpícího gelu o 2 jednotky pH. Toto pH znamená nižší iontovou sílu, tedy vyšší elektrický odpor. To vyvolává mobilitu proteinů než jiné nabité částice přítomné v gelu.

Co je separační gel?

Separační gel nebo štěpící gel technologie SDS-PAGE je vysoce koncentrovaný polyakrylamidový gel, který je umístěn na vrchol nízko koncentrovaného stohovacího gelu. Separační gel obsahuje vysoké množství polyakrylamidu (10%). Hodnota pH tohoto gelu je udržována na hodnotě pH = 8,8, což je vyšší hodnota pH než u stohovacího gelu.

Obrázek 02: Gelové elektroforetické zařízení

Když proteinové molekuly dosáhnou separačního gelu, migrace těchto molekul je zpomalena, protože separační gel je gel s vysokou koncentrací s malou velikostí pórů, který může působit jako značná bariéra pro pohyb proteinových molekul. Toto zpomalení umožňuje, aby ostatní proteiny pomalu migrovaly, aby dohnaly, což vedlo k úzkému, koncentrovanému pruhu mezi dvěma gely.

Jaký je vztah mezi stohovacím gelem a separačním gelem?

• Oba typy stohovacího gelu a separačního gelu se používají ve stejném zařízení.

Jaký je rozdíl mezi stohovacím gelem a separačním gelem?

Skládací gel vs separační gel
Stohovací gel je nízko koncentrovaný polyakrylamidový gel, který se umístí na horní část koncentrovanějšího štěpícího gelu (separační gel) technikou SDS-PAGE.	Separační gel nebo štěpící gel techniky SDS-PAGE je vysoce koncentrovaný polyakrylamidový gel, který je umístěn na vrcholu nízko koncentrovaného stohovacího gelu.
Umístění
Stohovací gel se umístí na štěpící (separační) gel.	Separační gel je umístěn na dno nádoby použité pro gelovou elektroforézu.
Koncentrace
Koncentrace stohovacího gelu je vysoká.	Koncentrace separačního gelu je nízká.
Obsah polyakrylamidu
Stohovací gel obsahuje asi 7% polyakrylamidu.	Separační gel obsahuje asi 10% polyakrylamidu.
pH
Hodnota pH stohovacího gelu je 6,8.	Hodnota pH separačního gelu je 8,8.
Velikost pórů
Ve stohovacím gelu jsou velké velikosti pórů.	V separačním gelu jsou přítomny malé velikosti pórů.
Řešení
Skládací gel poskytuje lepší rozlišení.	Separační gel poskytuje špatné rozlišení.

souhrn - Skládací gel vs oddělování Gel

Skládací gel a separační gel jsou dva typy polyakrylamidových gelů, které se používají k lepší separaci molekul proteinu v daném vzorku. Rozdíl mezi stohovacím gelem a separačním gelem je v tom, že pH stohovacího gelu je 6,8, zatímco pH separačního gelu je 8,8.

Odkaz:

1. „Elektroforéza na polyakrylamidovém gelu.“ Elektroforéza na polyakrylamidovém gelu (teorie): Virtuální laboratoř molekulární biologie II: Biotechnologie a biomedicínské inženýrství: Amrita Vishwa Vidyapeetham Virtual Lab. K dispozici zde  
2. „Jak funguje SDS-PAGE.“ Bitesize Bio, 16. února 2018. K dispozici zde
3. „Stohovací gel SDS-PAGE - BICH 608 (Polymenis-Pettigrew).“ Weby Google. K dispozici zde 

Obrázek se svolením:

1.'SDS-PAGE akrylamidový gel'Byaccount na anglické Wikipedii, (CC BY 3.0) přes Commons Wikimedia  
2.'Gel elektroforetický aparát 'Jeffrey M. Vinocur - vlastní práce, (CC-BY 2.5) přes Commons Wikimedia