Rozdíl mezi konkurenční a nekonkurenční ELISA

klíčový rozdíl mezi konkurenční a nekompetitivní ELISA je to kompetitivní ELISA používá inhibiční antigen, zatímco nekompetitivní ELISA nepoužívá inhibiční antigen pro test.

Enzymově spojený imunosorbentní test (ELISA) je imunologický test, který detekuje různé cíle, jako jsou protilátky, antigeny, proteiny a glykoproteiny. Je to rychlá a jednoduchá metoda. Proto se častěji používá pro výzkumné a diagnostické účely. ELISA zahrnuje použití enzymů a specifickou vazbu protilátky a antigenu. Na základě toho, jak se reakce vyskytují, existují čtyři typy ELISA: přímá ELISA, nepřímá ELISA, sendvičová ELISA a inhibiční ELISA. Přímá, nepřímá a sendvičová ELISA jsou typy nekompetitivní ELISA, zatímco inhibice ELISA je typem kompletní ELISA. Hlavním cílem tohoto článku je diskutovat rozdíl mezi konkurenční a nekompetitivní ELISA.

OBSAH

1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je konkurenční ELISA
3. Co je nekompetitivní test ELISA
4. Podobnosti mezi konkurenční a nekonkurenční ELISA
5. Porovnání bok po boku - konkurenční vs. nekompetitivní ELISA v tabulkové formě
6. Shrnutí

Co je konkurenční ELISA?

Konkurenční ELISA měří koncentraci antigenu ve vzorku detekcí interference signálu. Zde test používá inhibitorový antigen. Jedná se tedy o typ inhibiční ELISA. Během tohoto postupu antigeny přítomné ve vzorku soutěží s vybraným referenčním antigenem o vazbu na specifické množství značené protilátky. Tento postup dále začíná inkubací vzorku s nadbytkem značené protilátky. Také referenční antigen by měl být předem potažen na testovací destičce s více jamkami. Potom by měla být směs vzorků přidána na testovací destičku, která obsahuje referenční antigen. Volné protilátky se budou vázat na referenční antigen v závislosti na množství antigenu ve vzorku. Pokud je tedy přítomno více vzorku antigenu, bude detekován méně referenčního antigenu. Vytváří tak slabší signál.

Obrázek 01: ELISA

Naproti tomu, pokud vzorek obsahuje menší množství antigenu, bude stále více referenčního antigenu zabírat protilátky a bude dávat silný signál. Protože kompetitivní ELISA dává silnější signál, když vzorek obsahuje malé množství antigenů, kompetitivní ELISA je velmi citlivý test, a to i pro vzorky s malým počtem antigenů.

V některých konkurenčních soupravách ELISA se používá značený antigen místo značené protilátky. Zde bude značený antigen a vzorek antigen soutěžit o vazbu na primární protilátku. Podobně, když je množství antigenu ve vzorku nízké, množství značeného antigenu, který se váže na protilátky, bude vyšší a vytvoří silnější signál.

Co je nekompetitivní test ELISA?

Mezi čtyřmi typy ELISA jsou tři typy ELISA nekompetitivní. Jsou to přímé ELISA, nepřímé ELISA a sendvičové ELISA. Všechny tři formáty pracují podle společného principu ELISA s malými rozdíly v metodice.

Přímá ELISA používá enzymem značenou primární protilátku. Z tohoto důvodu nevyžaduje sekundární protilátku. Proto je přímá ELISA rychlejší než jiné typy ELISA. Primární protilátka se bude přímo vázat na imobilizovaný cílový antigen, který je přítomen v destičce. Proto bude probíhat reakce enzym-substrát, produkující viditelný signál.

Obrázek 02: Sendvičová ELISA

Na rozdíl od přímé ELISA nepřímá ELISA používá neznačenou primární protilátku a enzymem značenou sekundární protilátku. Jakmile se primární protilátka váže na imobilizovaný antigen, sekundární protilátka se váže na primární protilátku. Enzym v sekundární protilátce bude reagovat s antigenem a bude produkovat viditelný signál. Sendvičová ELISA se liší od přímé i nepřímé ELISA. Zde je protilátka imobilizována ke stěně testovací destičky.

Jaké jsou podobnosti mezi konkurenční a nekonkurenční ELISA?

• Konkurenční a nekompetitivní ELISA jsou dva typy technik imunosorbentního testu.
• Jsou to vysoce flexibilní a citlivé techniky.
• Kromě toho jsou kompetitivní i nekompetitivní ELISA imunoanalýzy spojené s enzymy.
• Obě metody také generují signál v důsledku reakce enzym-substrát.

Jaký je rozdíl mezi konkurenční a nekonkurenční ELISA?

Konkurenční ELISA je typem ELISA, který spoléhá na dokončení mezi antigenem analytu a značeným antigenem pro omezené množství specifické protilátky. Na druhé straně neexistuje žádná taková konkurence mezi požadovaným antigenem a referenčním antigenem v nekompetitivním testu ELISA. Toto je klíčový rozdíl mezi konkurenční a nekompetitivní ELISA. Podobně konkurenční ELISA je inhibiční ELISA, zatímco nekompetitivní ELISA není inhibiční ELISA. To je také rozdíl mezi konkurenční a nekompetitivní ELISA.

Konkurenční ELISA je navíc vhodnější k měření malého množství požadovaného antigenu. Je to citlivá metoda. Na druhé straně nekompetitivní ELISA nezávisí na počtu antigenů přítomných ve vzorku. To je tedy také rozdíl mezi konkurenční a nekompetitivní ELISA.

Níže infographic vysvětluje rozdíl mezi konkurenčním a nekompetitivním testem ELISA.

Shrnutí - konkurenční vs. nekonkurenční ELISA

Konkurenční a nekompetitivní ELISA jsou dva hlavní typy ELISA nebo enzymaticky vázaných imunosorbentních testů. Při shrnutí rozdílu mezi konkurenční a nekompetitivní ELISA se konkurenční ELISA opírá o soutěž mezi antigenem zájmu a referenčním antigenem vůči omezenému množství protilátek. Proto je kompetitivní ELISA také pojmenována jako inhibiční ELISA. Na druhé straně nekompetitivní ELISA se nespoléhá na konkurenci mezi cílovými antigeny a referenčními antigeny. Používá přebytek značené specifické protilátky k sledovanému analytu. Toto je klíčový rozdíl mezi konkurenční a nekompetitivní ELISA. Přímá ELISA, nepřímá ELISA a sendvičová ELISA jsou tři hlavní typy nekompetitivní ELISA.

Odkaz:

1. Bio-Rad. „Druhy ELISA | Bio-Rad. “ Bio, k dispozici zde.
2. „Čtyři typy ELISA“. Cusabio Life Science - váš biologický vědecký partner, k dispozici zde.

Obrázek se svolením:

“Elisa tipus” Autor Carolfv333 - Vlastní práce (CC BY-SA 4.0) Commons Wikimedia.
“Sandwich Immunoassay, ELISA” od NickCT - vlastní práce (CC BY-SA 3.0) přes Commons Wikimedia