Rozdíl mezi RT-PCR a QPCR

Reverzní transkripční polymerázová řetězová reakce (RT-PCR)

RT-PCR vs. QPCR

Pokroky v biotechnologiích vedly v průběhu let k objevu několika způsobů, jak se vypořádat s požadavky na transplantace orgánů. Dříve mohl jedinec, který dobrovolně daroval jakýkoli orgán bezprostředně po smrti, pacientovi, který to potřeboval, pouze zahájit operaci transplantací. Průběžné studie a výzkum biologů vedou k objevu kmenových buněk.

Kmenové buňky se vztahují k těm, které jsou odebrány z DNA embrya, které bude sloužit jako zdroj pro regeneraci buněk, které by byly v zásadě klonem orgánu, kde byla DNA získána. Zatímco aktivisté za lidská práva lobují za zastavení těchto postupů, úspěšné operace skutečně prokázaly účinnost vývoje kmenových buněk v transplantacích orgánů..

Než však člověk dokáže ocenit a plně porozumět kmenovým buňkám, je třeba se seznámit s různými terminologiemi spojenými s tímto vědeckým objevem. Kultivace kmenových buněk se zabývá DNA a jejím kódováním. Proto je nezbytné, aby studenti nebo jednotlivci se zájmem o obor rozlišovali mezi RT-PCR a qPCR.

Reverzní transkripční polymerázová řetězová reakce (RT-PCR) je jednou z mnoha variant polymerázové řetězové reakce nebo PCR. Tato laboratorní technika je široce používána v molekulární biologii, aby vědci vytvořili několik kopií konkrétní sekvence DNA prostřednictvím procesu vytvořeného jako „amplifikace“. Rozdíl mezi RT-PCR a tradiční PCR je v tom, že RNA je nejprve přepsána opačně do svého DNA komplementu, který využívá reverzní transkriptázu. Nová komplementární DNA obsahující reverzní transkripci bude poté amplifikována pomocí tradiční PCR nebo PCR v reálném čase.

Většina studentů studujících tento proces často udělá chybu při výměně reverzní transkripce PCR a PCR v reálném čase, protože tito dva jsou podobně zkráceni. Aby nedošlo k záměně, biologové označují PCR v reálném čase jako kvantitativní PCR v reálném čase nebo qPCR.

QPCR se výrazně liší od RT-PCR, protože qPCR je zodpovědný za měření amplifikace v okamžiku, kdy k ní dojde. Lze říci, že RT-PCR zahajuje proces amplifikace, zatímco qPCR měří průběh.

Kvantitativní PCR v reálném čase

QPCR skutečně revolucionizoval tradiční metodu jednosměrného přístupu, pokud jde o kvantifikaci DNA a RNA, protože použití metody qPCR umožňuje biologům určit počáteční koncentraci nukleové kyseliny ještě před pozorováním výsledků reakce a poznačil.

Aplikace qPCR, která je dnes považována za nejúčinnější a nejcitlivější analytickou techniku ​​pro genetické studie, se výrazně rozšířila. V současné době se podílí na kvantitativní analýze genové exprese, genotypizaci, detekci patogenu a analýze SNP, spolu s měřením interference RNA.

QPCR je často kombinován s procesem reverzní transkripce pro kvantifikaci messengerové RNA a MicroRNA přítomné v buňkách tkání pozorovaných a experimentovaných. To pak dává další viditelný rozdíl mezi těmito dvěma: RT-PCR lze použít pro proces amplifikace, ale pro kvantifikaci je třeba fúzovat s qPCR..

Je také známo, že QPCR je více kvantitativní, protože data mohou být shromažďována v průběhu exponenciální růstové (log) fáze PCR. Biologové poznamenávají, že množství vedlejšího produktu PCR je přímo úměrné množství templátové nukleové kyseliny, které bude měřeno pomocí qPCR.

Na druhé straně RT-PCR zdaleka nemá kvantitativní povahu, protože pozorování intenzity amplifikovaného proužku na gelu podle stanoveného standardu koncentrace může vést k „semikvantitativní“ inferenci.

Souhrn:

1.QPCR a RT-PCR jsou termíny používané v biotechnologii a používají se pro výrobu více kopií DNA.
2.RT-PCR se používá k amplifikaci reverzní transkripce kódu DNA; QPCR měří amplifikaci.
3.RT-PCR je pro amplifikaci, zatímco qPCR je pro kvantifikaci.
4.QPCR má kvantitativní charakter, zatímco RT-PCR není.